酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用
作者：成军 孙关忠 郑怀… 文章来源：中华医学检验杂志 1998年第1期第21卷 点击数： 813 更新时间：2005-7-17
近年来，酶标仪在临床实验室中的应用越来越普及［１］，而国内外有关其性能评价与鉴定方法的报道尚不多见；为了保证酶标仪检测结果的准确性和可靠性，我们对不同厂家及型号的仪器经过系统论证，初步建立了一套酶标仪性能评价指标与鉴定的方，同时应用该法对美国Bio-Rad 550型酶标仪进行了评价，结果满意，现将评价方法和应用结果报告如下： 一、材料和方法 (一)主要仪器与材料： 1.日本岛津UV-2201型分光光度计及AEL-40SM型电子天平；美国Bio-Rad550型酶标仪。 2.不同波长的滤光片（美国Bio-Rad公司馈赠）；Ｕ型酶标微孔板条（上海科华公司）；微量加样器（上海求精公司，200 μl±2％CV）；甲基橙（Sigma公司）及溶血液（生理盐水洗涤红细胞后，用蒸馏水配制成总胆红素为45、35、25μmol/L的三种不同浓度）。 (二)酶标仪评价指标和基本方法： 1.滤光片波长精度检查：用紫外可见分光光度计（波长精度±0.3 nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫描，其检测值与标定值之差即为滤光片波长精度。 2.通道差与孔间差检测：(1)通道差：取一只酶标微孔杯以酶标板架作载体，将其［内含200 μl甲基橙溶液，吸光度(A)0.5左右］先后置于八个通道的相应位置，蒸馏水调零，于490 nm处进行测定，各通道之间的差异用极差值来表示。(2)孔间差：选择同一批号酶标微孔板条(8条共96孔)分别加入200 μl甲基橙溶液（吸光度0.065～0.070）先后置于同一通道，蒸馏水调零，于490 nm处检测，其误差大小用±1.96s衡量。 3.零点飘移八只微孔杯置于八个通道的相应位置，均加入200μl蒸馏水并调零，于49 0 nm每30分钟测定一次，连续观察4小时；其与零点的差值即为零点飘移。 4.精密度评价［２］：每个通道三只微孔杯，分别加入200μl高、中、低三种浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，于490 nm作双份平行测定，每日两次，连续测定20天。分别计算批内、日内批间、日间精密度和总精密度的CV(%)值。 5.线性测定：准确配制5个系列浓度的甲基橙溶液，于490 nm蒸馏水调零平行检测。计算回归方程、相关系数(r)及标准估计误差Sy.x。 6.双波长评价：取一份甲基橙溶液，分别加入三种不同浓度的溶血液，先后于八个通道检测（测定波长490 nm，校正波长585 nm），每个通道测三次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。 二、结果 1.滤光片波长精度检测结果：见表1。 2.通道差与孔间差的检测结果：通道差与孔间差A值分别为0.013和±0.0042。 3.零点飘移：仪器八个通道的零点飘移A值均在±0.002范围内波动。 4.精密度评价：见表2。 5.线性测定：550型酶标仪于490 nm处检测甲基橙系列溶液，线性回归结果为：r=0. 999 9，回归方程Y=0.027+ 表1 滤光片波长精度检查
滤光片波长(nm)
标定值 405.0 450.0 490.0 540.0 550.0 585.0 620.0 655.0
实测值 404.8 448.2 489.1 540.3 549.6 585.1 619.5 654.7
精度差 -0.2 -1.8 -0.9 +0.3 -0.4 +0.1 -0.5 -0.3
表2三种浓度甲基橙溶液490 nm处精密度［CV(%)］评价结果
浓度 均值 批内 日内批间 日间 总
高 0.223 1.016 1.186 1.114 1.571
中 0.502 1.004 0.970 0.884 1.324
低 1.249 0.682 0.865 1.153 1.391
1.594X，标准估计误差Sy.x＝0.0133。 6.双波长测定评价：经统计学处理，结果表明仪器的双波长功能可以有效地消除溶血对测定结果的影响（P＞0.05）。 上述结果表明：酶标仪性能评价方法客观、科学，各项指标评价结果符合仪器的设计性能，结果满意。 三、讨论 1.在对酶标仪进行评估时，还应对仪器的自动化程度及售后服务进行全面了解。自动化程度如仪器的分辨率、报告的方式、可提供滤光片的最大数目、是否拥有用户自编程序及外接微机的功能和软件等；而售后服务则是仪器使用顺利与否的根本保证，用户应当与信誉较好、服务周到、维修方便的代理商进行洽谈，以免仪器一旦出现故障而不致于影响工作。 2.本研究建立的酶标仪性能评价与鉴定的方法是以490 nm用甲基橙为例的，对于其他波长和干扰组分也可采用相应物质的溶液进行评价和论证，其方法相同（如655 nm用亚甲基蓝；620 nm用伊文蓝等），这里就不一一赘述。参考文献 1 eisenwiener HG, Keller M. Absorbance measurement in cuvettes lyinglongitudinal to the light beam. Clin Chem, 1979,25：117-121. 2 余立江,吴锦华,杨树德.NCCLS文件EP5-T推荐的评价仪器精密度性能方法的应用.中华医学检验杂志,1992,15:172-174.
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