胶体金试纸条法检测粪便隐血方法评价
粪便常规检查包括形态学检查和潜血检查。潜血是指消化道出血量很少，肉眼不见血色，而且少量红细胞又被消化分解以致显微镜下也无从发现的出血状况。潜血检查对诊断多种消化道出血性疾病有重要价值，也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段。临床研究证实，粪便中带有癌肿的微量出血是早期肠癌唯一可以查出的异常现象，因此潜血试验成为人们不断深入研究的热点。过去一直沿用化学法来检测粪便潜血，近年研发了胶体金免疫层析法，将单克隆技术与胶体金技术结合，利用抗人血红蛋白或抗人红细胞基质的单克隆抗体与人血红蛋白或人红细胞有高度特异性的特点检测粪便隐血，不受动物的血、肉、含过氧化物酶的新鲜蔬菜、铁剂、维生素C 的影响。此法灵敏度高，反应快速，血红蛋白为0．21ug／mL时即可阳性。在临床各种疾病导致出血的诊断中起到了准确无误的效果。1 胶体金免疫层析法检测原理
胶体金免疫层析法融合了免疫层析技术和胶体金显色原理，为特异地快速检测粪便潜血建立了一种新的免疫学方法。该法是利用纤维膜的毛细作用，使待测物抗原或抗体沿表面向前运动，与待测区标记的捕获物特异结合而聚集显色。免疫层析一步法所用的抗体有两种：抗人血红蛋白抗体和抗人红细胞基质抗体，前者可检出消化道任何部位的出血，而后者只能检出下消化道的出血。目前一般是用抗人血红蛋白抗体来特异性结合人血红蛋白抗原。此法简便、快速，只特异地针对人血红蛋白抗原表位，基本排除了饮食及药物等因素的干扰，被世界卫生组织胃肠镜检查协会推荐作为粪便潜血试验的一种较为确认的方法。
2 方法
2．1 材料胶体金隐血试纸条：美国进口一步法便隐血试验试纸条(简称WH试纸)。
2．2 方法(WH试纸法) 取干燥、洁净载玻片一块，滴加蒸馏水2—3滴，取少量粪便涂于玻片上的蒸馏水中，用WH试纸条取样端蘸取粪便混匀液(如为尿液、胃液标本，可直接用试纸蘸取标本)，1— 5min内观察结果，判断以显示出现两条红色区带为阳性；仅出现一条对照区带红线为阴性；若反应线和对照线均匀未明显示，或仅在反应线出现红色区带而对照线不出现，证明试纸条无效。
3 结果
3．1 临床实验采集60例临床确诊为消化道恶性肿瘤的住院患者样本，60例无胃、肠疾患的正常人，年龄12—75岁。结果可见，肠道恶性肿瘤阳性率100％，胃、食道癌患者可能侵犯程度及方向不同，其阳性率偏低(56％)，但伴有溃疡发生的患者，其隐血均为阳性。而用WH试纸条检测60例正常人未见1例阳性。
3．2 前后带现象的排除胶体金免疫层析法具有高度的敏感性，但血红蛋白浓度过高时反而会出现假阴性结果，这是由于单克隆抗原体反应中，过量的血红蛋白会导致反应体系中抗原的过剩，出现前带现象而导致假阴性结果。此时，需要将已稀释的标本再稀释50—100倍重做。本试验证明，当样本中血红蛋白含量过高(>30000ug／mL)或过低(<0．03ug／mL)时，试验结果均为阴性，只有血红蛋白含量在3—300ug／mL时才为强阳性反应。
4 讨论
临床常用潜血试验，主要有化学法和免疫学方法。化学法有邻联甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、氨基比林法、愈创木酯法等。其原理基于血红蛋白中的含铁血红素能催化试剂中的过氧化氢，使其释放新生态氧，氧化上述色原物质而显色。显色
的深浅反映了血红蛋白的多少，亦即出血量的大小。化学法虽简单易行，但方法上缺乏特异性。由于现有化学法受其他干扰因素多、假阳性率高、冰醋酸配成的试剂易形成晶体等条件限制，近年来免疫学方法已逐渐替代了化学方法。免疫学方法主要包括免疫单抗法、酶联免疫吸附试验、免疫斑点法、胶乳免疫化学凝聚法，放射免疫扩散法、反向间接血凝法、胶体金标记夹心免疫检验法等，此类试验所用抗体分为两大类，即抗人血红蛋白抗体和抗人红细胞基质抗体。用单克隆、多克隆的双抗体夹心胶体金显色技术，以试纸条一步法检测便隐血，方法简单、快速，无论是粪便还是尿、胃液，都具有很好的灵敏度和特异性。
采用胶体金免疫法测定隐血方法简单、快速，对人体无害，具有很高的灵敏度和特异性，不受饮食及药物限制，对Hb的最低检测限度可达0．14％ug／mL，异种动物血及化学法常见的干扰物均不受影响，提示试纸条仅与血红蛋白抗原发生特异性结合。但胶体金免疫层析技术目前仍存在一些问题需要改进：①只定性不能定量。目前胶体金免疫层析技术只是定性检测，仅给出阳性或阴性结果，不能对消化道出血病人进行疗效观察。很难确定定量反应关系，只有抗原抗体比例合适时才出现阳性反应，结果报告只能报阳性或阴性，不能报告强阳性、弱阳性或加号(++++、+++、++、+)，因此观察止血程度欠佳。随着胶体金免疫层析技术的发展，在定量检测上将得到突破，在精确控制加样量和抗体包被量的条件下，用显色时间的长短来定量，通过用光电比色技术来确定被检测样本含量的多少。②假阴／阳性结果。有些患者的血红蛋白在胃部时，珠蛋白链被酸迅速地水解，在小肠被蛋白酶降解，血红蛋白可能被充分降解或消化殆尽而失去单克隆抗体所特异结合的抗原决定簇，同时体外胃肠道内细菌的作用也可使粪便中血红蛋白免疫活性丧失，导致假阴性结果。有些患者血红蛋白的抗原与单克隆抗体不匹配，或抗原决定簇被糖化血红蛋白、触珠蛋白等屏蔽引起假阴性。抗原抗体反应受温度影响较大当冬天气温较低时，有些阴性标本会延长时间出现阳性结果，所以，在试验温度较低时应适当延长观察时间或做保温处理，以免人为出现假阴性结果。
由于免疫学方法的高度敏感性，又由于有正常的生理性出血，在某些正常人特别是服用刺激胃肠道的药物后可造成假阳性，停药后可恢复正常。另外不是所有肠癌都每天出血，只有溃疡性癌肿才会持续出血，单次送检粪便标本会影响粪便潜血的
阳性率。故对疑有大肠癌或隐匿性消化道出血的病人应连续取粪便标本3次追踪做潜血试验，结果才会更加可靠。
多元检测是胶体金免疫层析技术发展的方向，即在一条膜上可同时检测多种物质，对有联检意义的多个指标的检测有很大的应用价值。胶体金免疫层析技术将继续提高其灵敏度和准确性，使其成为更简便、快速和准确，更高效、价廉且适用于大规
模临床应用的检测方法。胶体金免疫层析法必将长期作为潜血试验的首选方法，普及应用于基层医疗机构，并将取代传统的化学法，具有广阔的应用前景。
本文编辑：范伟伟
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