金标快速免疫试剂盒检测沙眼衣原体的性能评估
李启宁1，夏理评21.南京大学医学院附属鼓楼医院；2.南京市卫生防疫站
摘要：目的对目前最常用的两种胶体金标记快速免疫试验检测泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的结果进行临床评估。方法 共检测临床标本188例，包括男性尿道拭子标本52例，女性宫颈拭子标本136例。每例患者取拭子三支。前两支拭子标本分别用于两种金标快速试验（“英国立明”及“美国思创”）。拭子使用顺序在每隔10例患者后作一交替。第三支拭子用于酶免法（“Dako酶免”）检测。结果以酶免法结果为参照，两种金标法对男性标本的敏感性分别为“英国立明”58.33%，“美国思创”为66.67%；对女性患者的敏感性分别为“英国立明”85.29%，“美国思创”82.35%。综合男女标本的检测结果，敏感性分别为“英国立明”78.26%，“美国思创”78.26%；特异性分别为92.96%、94.37%。结论两种金标类试剂检测结果之间差异无显著性，其敏感性均较低，尤其是对男性尿道拭子标本的漏检率较高。
关键词：沙眼衣原体；酶免法；金标免疫法
沙眼衣原体引起的泌尿生殖道感染是我国目前最常见的性传播疾病之一。细胞培养分离沙眼衣原体是传统的实验室诊断“金标准”。但鉴于该方法操作繁琐，约需一周时间才能报告结果，故未能普遍应用。目前，在我国被广泛采用的方法多为检测标本中衣原体抗原，如胶体金标记快速免疫试验，酶免疫试验，直接免疫荧光试验等。
胶体金标记快速免疫试验因具有操作简便快捷的优点，是目前最常用的方法之一。
本研究对一种新型酶免疫试验及两种金标快速免疫试验的检测结果进行了比较，评估了临床上常用的两种金标快速免疫试剂盒的性能。
材料和方法
一、标本来源与采集
所有标本均取自南京市鼓楼医院门诊患者。按患者就诊先后随机取材。共取标本188例，其中男性52例，女性136例。每次患者取拭子3支。男性用拭子伸入尿道口内2~4cm，捻转数次取出。对女性患者，棉球擦净宫颈口外粘液后，棉拭伸入宫颈内约1cm，稍捻转并停留约15s 后取出。
男女标本的第一和第二支拭子分别用于两种金标快速免疫试验，置4~8℃保存，12h内完成检测。第三支拭子用于酶免试验。将第三支拭子置酶免试剂盒提供的专用标本保存液中2~8℃保存，7d内完成检测。
二、金标快速免疫试验一
Clearview Chlamydia MF试剂盒（简称“英国立明”），英国Unipath公司生产。拭子标本置试剂盒提供的专用提取管中，加标本处理液0.6ml，80℃热处理10 min后，取出冷却至常温，加样至测试板，30 min内判读结果。
三、金标快速免疫试验二
StrongStep Chlamydia Antigen Test 试剂盒（简称“美国思创”），美国MediCare 公司生产。拭子标本置抗原提取管中，加A液8滴，搅动拭子约2min，继加B液6滴，混匀后取出拭子。盖上管塞，向测试板中加样4滴，30min内判读结果。
为了尽可能减少拭子取材先后顺序不同，所含衣原体抗原量不等所致的结果误差，将用于两种金标免疫试验的拭子顺序在每隔10例标本时作一轮换。如对第一批10例标本的第一支拭子用于“英国立明”的检测，第二支拭子用于“美国思创”的检测；对第二批10例标本则相反，第一支用于“美国思创”的检测，第二支用于“英国立明”的检测。
四、酶免疫试验
IDEIA PCE Chlamydia 试剂盒（简称“Dako酶免”），丹麦Dako公司生产。从男女患者所取的第三支拭子，置1 ml 标本保存液中，振荡混匀后弃拭子。经沸水浴10 min 后，取200ul 至酶标板孔，经振荡孵育90min，洗板4次，加A及B液，再次振荡孵育30 min 后肉眼判读结果。
结果
测试结果见表1和表2。
http://www.ivdchina.org/file/upload/201506/20130816144831.png
对男性前尿道拭子标本，两种金标快速方法相对于酶免法的敏感性分别为“英国立明”58.33%、“美国思创”66.67%，特异性分别为92.5%及90%。
对女性宫颈拭子标本，两种金标快速方法相对于酶免法的敏感性分别为“英国立明”85.29%、“美国思创”82.35%，特异性分别为93.14% 及96.08%。
http://www.ivdchina.org/file/upload/201506/20130816145102.png
综合男女标本检测结果，“英国立明”敏感性为78.26%，特异性为92.96%；“美国思创”敏感性为78.26%，特异性为94.37%，两种金标快速试验的性能差异无显著性。
上述标本中有1例男性、2例女性标本经两种金标免疫法检测均阳性而酶免疫法为阴性，因临床失访而未能作进一步检测。
讨论
胶体金标记的快速免疫试验自诞生以来，因其操作简便，无需特殊设备而迅速被广泛应用于各种抗原或抗体的检测过程中。目前，有多种商业化金标快速试剂盒用于沙眼衣原体的检测，其中以“英国立明”试剂盒应用最为广泛。
对该类金标快速免疫试剂盒而言，因方法学上的限制，抗原抗体结合后直接显色，无信号放大过程，所以要求待检标本中的抗原含量较高。当衣原体抗原含量低于一定水平时，将可能造成漏检。本试验结果表明，两种金标快速试验对男性前尿道拭子标本的敏感性均不理想，而对女性宫颈拭子标本的敏感性尚可接受，其原因可能与男性前尿道拭子标本中抗原含量相对较少有关。本研究结果与其它文献报道结果相符合。
“Dako酶免”方法是在传统酶免方法基础上改良的一种试验方法。其一，采用了一种拥有专利的酶单抗多聚复合物技术。这种复合物是以右旋糖酐长链为骨架，长链上联接有多个单抗分子及碱性磷酸酶分子。一个抗原位点可与一条长链结合。与传统酶免法相比，大大提高了抗原与酶分子之间的配比率。其二，设置了两次酶促反应。第一次酶催化底物生成的产物参与第二次酶促反应，使检测信号再次放大。该方法使其检测的灵敏度比传统酶免方法提高了2~5倍。临床应用结果表明，其敏感性可达到与PCR 等基因诊断方法相当的水平。基于上述原因，故在本试验中将该方法作为参照，并用第三支取材拭子作为其检测对象。这可能是导致3例标本经两种金标免疫法检测结果均阳性而酶免法检测结果为阴性的原因之一。
编辑：范伟伟
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