生化仪上高值IgM标本漏检原因分析

我是谁！

作者：台州市中医院  金宗华

临床化学自动分析中,试验参数的正确设置是保证检验质量的重要因素。在工作中我们对一例巨球蛋白血症患者进行IgM测定时发现,生化仪上原液血清标本为1.11 g/L,经40倍稀释后结果为14.4 g/L。同一标本在生化仪上稀释前后的检测结果存在极大差异。为了分析高值IgM标本稀释前在生化仪上的漏检原因,我们在OLYMPUS AU640型生化分析仪上将测定方法由终点法改为固定点法,通过设定限额参数来自动识别抗原过量的发生。

一、材料和方法

1.仪器和试剂 OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪,每次测定前均按要求对仪器进行保养和校正。中外合资北京利德曼生化技术有限公司生产的IgM定量测定试剂盒,方法为免疫比浊法。

2.方法 在自动生化分析仪上将测定方法由终点法改为固定点法,从仪器测量反应曲线图中在前带与等价带交界处选取合适的吸光度( A)值,设置为最大允许 A值(Max A)。将巨球蛋白血症患者的高值IgM血清标本分别以原液、2倍稀释、10倍稀释、20倍稀释、40倍稀释、80倍稀释,在仪器设置Max A后分别测定该系列IgM标本。

二、结果

不同稀释度时生化仪上IgM测定值,原液、2倍稀释、10倍稀释、20倍稀释、40倍稀释、80倍稀释分别为1.11、1.44、5.00、9.40、14.41和7.23 g/L。

三、讨论

免疫透射比浊测定方法是利用抗原抗体在液相中反应形成浊度进而比浊测定的一种方法,其基本原理是抗原在相应的一定量的过量抗体溶液中反应形成抗原抗体复合物,其浊度的大小与抗原含量呈正比。但这种正比关系并非直线线性关系,当抗原浓度过高(出现等价带及后带反应)时,这种正比关系即不存在。如果仍然依据这种关系进行计算,就会发出错误结果,这就要求我们注意识别抗原过量的现象,稀释后重测。

临床化学自动分析均为程序控制的自动分析,Max A是OLYMPUS AU640生化分析仪上斜率上升的两点或速率方法测定中设置的反应Max A值,如果反应的 A值超过此值,仪器自动在检验结果旁标注“D”,以提示稀释标本后重新测定。而终点法不能进行Max A的设置,因为终点法是起点为零点的一种特殊固定点方法,是固定点法的一种特殊形式。我们将仪器测定方法由终点法改设为固定点法,设置Max A后测定IgM,对于结果在检测上限的标本无影响,对于高值IgM标本均在结果旁标注有“D”,提示超出了检测上限,要求稀释标本重新测定,避免了临床高值IgM标本的误报。

抗原抗体反应的免疫比浊分析方法由于其很好的敏感性和特异性而得到广泛应用。理论上任何微量物质,只要能获得相应的特异性抗体,即可用免疫测定进行检测。但是由于抗体制备的复杂过程及较高的生产成本,商家供应的试剂抗体浓度和亲和力较低,多要求用户将标本(抗原)稀释后进行测定。但随着激烈的市场竞争和技术的进一步提升,厂家经过提高供应试剂中抗体的浓度,可以不用稀释标本直接测定,并且使可测定物质的上限明显提高,以满足临床实验室需要。但也有一些疾病如巨球蛋白血症时IgM浓度极高,超出了试剂的可测定范围,这就要求我们对仪器进行限额参数Max A的设置,自动识别抗原过量的发生,以提示实验室人员将标本稀释后重测。

基于抗原抗体反应的免疫透射比浊测定方法的剂量反应曲线是一条双向反应曲线,在抗体浓度一定的条件下,IgM浓度与 A值呈正比,关系为前带区域;当反应值处于等价带时,反应 A值变化不大;而当反应值处于后带区域时, A值反而下降。从本研究结果可见,6个不同稀释限度时生化仪上的IgM测定值差异极大,以40倍稀释限度较为适宜高值IgM标本的检测。综上所述,为了防止高值IgM标本在生化分析仪上漏检现象的发生,仪器中试验参数的设置应将测定方法由终点法改为固定点法,并选择适宜的稀释限度将标本稀释后再进行测定,以确保自动生化分析仪上免疫透射比浊测定方法的检测结果准确可信。