利用高速离心法消除脂血对生化测定的干扰

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                                                                                                                石凌波1，史惠群2
                                                        1.广州军区广州总医院检验科，2.广州市越秀区第二人民医院检验科
       摘要：目的  利用高速离心法消除脂血对常见生化测定项目（ALT、Tbil、AST、TP、ALP、GGT、Urea、Cr、Glu、CK、LDH、UA）的干扰。方法  将临床收集的血液分为血脂正常组［三酰甘油（TG）：0.44~1.65 mmol/L］、中度血脂异常组（TG：3.66~11.0 mmol/L）和高度血脂异常组（TG：12.0~32.2 mmol/L），经常规低速离心（367~537 Xg）后，分离出血清并加盖密封，再经高速离心（7155 Xg），弃除乳糜微粒层，收集下清液，分别测定各组标本高速离心前后的生化结果，并进行方法对比试验。结果   高速离心前后，血脂正常组与中度血脂异常组的生化测定结果十分接近，而高度血脂异常组，由于受到脂血浊度的严重影响，使结果在高速离心后得到明显改善。结论  利用高速离心法，可以消除脂血对常见生化测定项目的干扰。
       关键词：脂血；高速离心；干扰；生化测定

       临床工作中常遇到不同程度的混浊血清，如不处理，生化指标的测定将会受到干扰，特别是高脂血清和临床注射脂肪乳的患者血清，大量的乳糜微粒对入射光产生散射，严重干扰生化结果。我们采用高速离心法消除脂血干扰，取得了良好效果。
材料和方法
一、材料
       1. 仪器  法国S500P半自动生化分析仪，日本Hitachi 7150全自动生化分析仪，Eppenddorf MiniSpin 小型高速离心机。
       2. 试剂  丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿酸（UA）、肌酸激酶（CK）：上海科华生物公司；总胆红素（Tbil）、肌酐（Cr）：英国朗道RANDOX公司；天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素（Urea）、血糖（Glu）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）：北京中生生物公司；碱性磷酸酶（ALP）：宁波亚太生物公司。
       3. 参数设置  按照试剂说明书设置。
       4. 脂肪乳注射液（Intralipid 30%） 广州华瑞制药有限公司生产，每1000 ml 含：注射用大豆300g，注射用卵磷脂12g，注射用甘油16.7g，注射用水加至1000 ml。批号：002129。
       5. 标本来源  均取自我院门诊或住院患者。
二、方法
       1. 相对离心力（RCF）计算  r，其中N为离心机转数（r/min），r为离心半径（cm）。常规离心时，r为8.2cm，故2000~2500 r/min 的RCF 相当于367~573 Xg；高速离心时，其r 为6.4cm ，故10000 r/min 的RCF 为7155 Xg。
       2. 常规离心法  将临床收集的血标本经低速离心（367~573 Xg，5min）分离血清测定。
       3. 高速离心法  将常规离心后的血清加盖密封，经高速离心（7155 Xg，8min）后，分离出乳糜微粒层，吸下清液测定。
结果
一、脂血吸收光谱曲线
       在S500P半自动生化分析仪上，用1份混合血清调零，分别对1份脂血标本和1份同一混合血清加脂肪乳的标本（血清空白及浊度相近）进行从330nm 到860nm 波长的扫描，两曲线吸收峰基本一致，因此可用脂肪乳模拟做成脂血标本来研究。
二、脂肪乳对生化测定的影响及消除
       选取外观澄清的临床血标本20份，用常规离心法离心制成双份血清，共2组。A组加入等量不同浓度的脂肪乳（0.12%~6.00%）制成不同程度的脂血；B组加入等量的去离子水制成非脂血血清对照，上机测定，然后用高速离心法再测1次A组的下清液，结果见表1。

三、高速离心法消除血脂干扰
       选取血脂正常（TG：0.44~1.65 mmol/L）、外观清亮的临床标本20份，常规离心法离心制成双份血清，共2组。仅将其中一组再用高速离心法，取下清液，两组同时上机测定。结果表明，两组结果基本一致。
       选取血脂异常（TG：3.66~11.0 mmol/L）、外观混浊的临床标本20份，同上处理。结果表明，两组结果基本一致。
       选取血脂异常（TG：12.0~32.2 mmol/L）、外观呈白色乳状的临床标本10份，同上处理。结果见表2。

讨论
       从表1可见，脂肪乳对ALT、AST、GGT、Cr、TP等生化指标的测定产生较大系统误差，但经高速离心后，对以上生化指标的干扰均得到明显纠正，比例误差与恒定误差大大减少，说明用高速离心法可以消除脂血对测定的干扰。
       另一方面，高速离心法对血脂正常、外观清亮的临床标本以及中度血脂异常标本的生化测定并无影响，其结果在高速离心前、后基本保持一致。这是因为除TP、Alb外，各项目的测定方法均扣除了标本空白，加之标本混浊并不是太严重所致。虽然TP、Alb采用单试剂的终点法测定，但由于在参数设置过程中使用了双波长（次波长/主波长：TP为660nm/546nm；Alb为700nm/660nm），也起到了消除干扰的目的。
       从表2可见，对于高度血脂异常标本，随着脂血浊度的加深，其扣除标本空白与脂血对测定的干扰逐渐不成比例，当反应体系（试剂与血清的混合体系）的吸光度值超过3.3时，大量的乳糜微粒对入射光产生散射，使日立7150全自动生化分析仪不能准确测定吸光度，仪器自动报警，提示其浊度已超过检测范围，从而导致扣除的标本空白过高。这就是ALT、AST、GGT、Cr、CK、LDH、TBil 等生化结果产生误差，甚至出现负值的原因；另一方面，由于每项生化指标加入血清与试剂的体积不尽相同，使脂血在反应体系中的稀释倍数也存在着差异，这样不同项目脂血的干扰程度是不一样的，这就是Urea、Glu、UA等项目基本不受干扰的原因。脂血在TP 660nm/546nm处有较强的吸收峰，而在Alb 700nm/660nm 处却有较弱的吸收峰，尽管两者的血清稀释倍数和测定方法近似（单试剂终点法），但Alb的抗干扰能力却大大>TP。总之，从表2可见，无论何种原因造成脂血对测定的干扰，通过高速离心法是可以消除的。
       众所周知，血清乳糜微粒中含有近84%~88%的TG和近4%的TC。所以，高速离心后的下清液必然导致TC或TG减少，特别是TG浓度会明显下降。因此，高速离心法不宜对TC或TG等血脂指标进行测定。这时，可以通过对原血清进行稀释来加以测定。
       近年来，糖尿病血脂代谢紊乱、家族性高血脂血症以及饮食上摄入过多高脂食品的患者不断增多，日常标本中TG在10~20 mmol/L 已屡见不鲜，血清似奶油，无法报告检验结果，只能写上“标本严重脂血”，另一方面，外科手术、烧伤、肿瘤患者静脉注射脂肪乳营养剂也出现同样的情况。为了解决这一问题，许多作者提出了多种方法，王丹等采用扣除标本空白法来消除脂血干扰，但该法只适合于中度以下的脂血标本，这与本试验结果一致；另外，该作者又采用磷钨酸-镁沉淀剂或聚乙二醇-硫酸葡聚糖沉淀剂消除脂血，取得良好效果，但该法由于在试剂中加入了附加成分，改变了测定的原反应体系，不仅操作繁琐且沉淀后的上清液只能测定部分生化指标（UA）；郑治钢等采用乙醚处理脂血标本，也面临同样问题。本试验显示，对于血脂正常和中度混浊的血清，其脂血并不影响测定，而对于高度血脂异常血清采用高速离心法是可以消除脂血干扰的。
                                                                                                                                        编辑：范伟伟