当我看见组长用错了染液…

新佐罗

作者：河南省安阳市人民医院检验科  位冒冒

有一次，与组长共同值班。有一个男性尿道分泌物做超高倍显微镜检查，该分泌物呈黄色脓性，根据以往的工作经验，高度怀疑其为“双球菌”感染；于是，在做盐水湿涂片前，需要先直接涂片进行染色镜检；这时，我却看见组长竟然用瑞-姬氏染液开始染色了。

我清楚的记得，几年前接触该方面工作时，其他同事分明都是使用革兰染液染分泌物标本的；而且，一般情况下，观察微生物形态、染色与初分类时也大都使用革兰染色法。于是，我委婉的提醒道，“怎么用瑞-姬氏染液染色呢？不是应该用革兰染色染双球菌的吗？”组长说，“我以前看过一些文献，用瑞-姬氏染液染分泌物，结果会很好看（容易观察）。”“那用瑞-姬氏染色怎么判断双球菌是革兰阴性还是阳性呢？”组长接着说，“咱们报的那项内容只是‘有无双球菌’，并不要求判断革兰阴性或阳性，再根据染色后镜检结果提示病人是否需要做淋球菌培养。”

虽然，我慢慢的接受了组长的观点，但实践才是检验真理的唯一标准，得看一下使用瑞-姬氏染液染色的实际效果才行；直到我们遇到了一份含有革兰阴性双球菌（同标本革兰染色验证）的男性分泌物标本，使用该染色后实际效果如下图，双球菌被染成深紫蓝色/深蓝色，与白细胞的颜色对比鲜明，也有利于观察其形态结构。

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一、瑞-姬氏染色的优势

然后，根据组长所述的文献，我们也查到了一些相关文献报道，查知瑞-姬氏染色也有其优势：

相对于革兰染色来讲，瑞-姬氏染色更加简便、快速。在男性尿道口分泌物中，革兰阴性双球菌的出现常伴随着大量的白细胞，而在白细胞胞浆中观察到双球菌的临床意义更大；瑞氏染液对胞浆着色效果好，姬姆萨染液对胞核着色效果好，可将革兰阴性双球菌被染成深紫色，使白细胞与双球菌的着色颜色对比鲜明，更有利于油镜下的观察和辨别。

革兰染色也有其不足：首先，染色前的涂片热固定，可能会因高温造成细胞破裂，双球菌从细胞中逸出，被误判为“细胞外”而降低其临床诊断意义；其次，当涂片过厚时，容易将革兰阴性双球菌染成革兰阳性，当使用乙醇进行脱色时，脱色过度或不彻底都会对识别造成干扰；另外，如患者病情时间长或女性阴道分泌物，由于标本中的杂菌比较多，革兰染色特异性和敏感性都会比较差。

二、超高倍显微镜与染色的真正意义

超高倍显微镜在分泌物直接涂片的检查中，配合成像系统可以达到超高的放大倍数，可以清晰的把握分泌物中的滴虫、白细胞、真菌菌丝及孢子、线索细胞等项目，并可初步诊断支原体、衣原体、双球菌等病原微生物的感染，检验快速、简便，且为进一步的确定性诊断提供依据。双球菌作为其中一个项目，因其常处于白细胞胞浆的特点，在成像系统中直接观察辨别尚有一些难度，一般都是再结合涂片染色综合判断。

超高倍显微镜加染色可以确诊淋病奈瑟菌吗？当然不能，确诊淋病奈瑟菌仍需要细菌分离培养及鉴定、PCR等检验手段。那么，超高倍显微镜加染色对于检测分泌物中双球菌的意义，重在筛查与初步诊断，提出进一步细菌培养及鉴定的建议。

三、革兰染色的地位

革兰染色作为细菌染色最常用、最经典的染色方法，对于绝大多数标本分离培养之前进行革兰染色，可以初步将细菌分类，缩小识别范围，有助于进一步的细菌鉴定。

检验工作中常见的双球菌感染包括肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和卡他莫拉菌等；其中，仅肺炎链球菌为革兰阳性，即革兰染色对于初步区分双球菌种类方面的作用较小。在油镜下观察分泌物染色标本时，尚需根据细菌形态进行鉴别，淋病奈瑟菌镜下特有的双肾样、咖啡豆样凹面相对形态，即可与其他常见双球菌进行区别；因此，单纯对于双球菌的初步鉴别，个人认为，革兰染色与瑞-姬氏染色的差别不大。

四、初步筛查与灵敏度

许多的检验项目或检验方法与手段都是以初步筛查为目的的，对于疾病的诊断起辅助作用，检验科将患者初步筛查的数据反馈给临床，临床医生再根据患者的具体病情做进一步的检查申请。

灵敏度与特异性就像鱼和熊掌不可兼得一样，不同的检验方法都有其对灵敏度和特异性的特殊要求，初步筛查的实验一般重在高灵敏度，确诊实验重在高特异性。在不可兼得的情况下，筛查实验对于简便、快速、价优等方面的要求才得以实现。

最后，请问大家，你们实验室用什么染色方法筛查双球菌呢？您认为分泌物染色观察双球菌时，革兰染色与瑞-姬氏染色有没有较大区别呢？欢迎留言！

参考文献：
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<div class="keytags">关键词：双球菌瑞-姬氏染液革兰染色