自身抗体检测的质量控制和检验程序

亮仔

                                                                                                    第二军医大学附属长征医院    仲人前
       自身抗体检测以在临床广泛应用，如诊断和鉴别诊断、判断疾病活动程度、判断治疗效果和预后等。检测自身抗体的方法有很多，本文主要介绍以Hep2细胞为基质的间接免疫荧光法检测抗核抗体的质量控制和检验程序。
一、分析前的试剂和检测准备
       （一）HEp-2细胞 要求玻片上细胞密度适当和分布均匀；200倍高倍镜下每个视野至少有3-5个有丝分裂相细胞；能表达相关抗体的靶抗原；细胞形态学稳定；背景荧光低。
       （二）检测场所 应有单独的区域进行检测操作和荧光显微镜观察；确保环境洁净、尘埃少；显微镜室至少能容纳二个人同时工作；通气良好；实验室计算机联网有利于简化工作程序和记录。
       （三）标本采集和保存 本实验用血清；血清保存在4 ?C，72小时内可用；如保存于-20 ?C或更低，可用时间则更长，但不要反复冻融。
       （四）抗人IgG荧光抗体  应具有IgG特异性；FITC/蛋白比值约3.0；抗体/蛋白比值≥0.1；特异抗体含量为30-60μg/ml；确定工作稀释度。
二、检测程序
       （一）标本处理  检测自身抗体的分析前程序并非关键。但对溶血、脂血和黄疸应作记录，因有可能影响检测系统；分析过程必须按照厂方说明进行；孵育时间、标本稀释或缓冲系统的差异均能影响结果，故应对方法学进行确认。标本处理过程常在常温下进行；保持检测系统的完整性；注意过期日期及试剂的正确贮存条件。如二抗，贮存不当会导致自身抗体效价明显下降；建议实验室各自建立每种玻片的最佳容量并写入SOP中；每个孵育过程应放在潮湿箱内以防标本干燥；准确加样，不溢出到邻近区域；孵育、洗涤按要求进行；读片后，玻片置于冰箱，可保存24小时。如要保存更长时间，可将玻片密封包好置?20?C 。
       （二）血清稀释  按试剂说明书要求稀释血清；阳性结果时，血清进行等比稀释。
       （三）  质控品  阳性和阴性质控品应如同标本一样进行相同的操作过程；对于重要的荧光图型，每个一定间隔，应采用疾病特异的自身抗体阳性质控品；阳性质控品有商品化的，也可实验室自己制备；理想化的是应用商品化或CDC的特定质控品；根据国家标准和指南，参加独立于供应商的室间质评。
       （四）  显微镜 首先要判断荧光强度；应重视有丝分裂，判断基本图型；更换灯泡后，应对显微镜作一定的校准。
三、结果的评价和解释
       检验报告中必须描述每个图型及其滴度；有的图型具疾病相关性，也可提示做特异性免疫检测。如遇到图型不典型、意义不明确，也应在检验报告中有注解以便临床医师知晓；检验报告应由资深人员出具；各实验室应建立自己的参考区间。
                                                                                                                                        编辑：范伟伟