几种常见的细菌耐药表型的检测方法

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       细菌的耐药表型是细菌耐药机制的外在表现，细菌的耐药机制只要有产生灭活酶、通透障碍、外排、靶位修改这四种，但是他们的外在表现却有很多种，他们怎么检测呢？下面我就介绍几种常见的耐药表型及检测方法。

β-内酰胺酶
       是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革兰阴性杆菌间质中；检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头孢硝噻吩纸片法。头孢硝基噻吩显色法（Nitrocefin）：制配纸片→灭菌水湿润→涂测试菌于纸片上，10min观察纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置1h内观察）。
       仪器法：Vitek、Microscan的药物测试卡中均带有检酶功能。
       如果青霉素的药敏结果出现以下情况，需要做诱导β-内酰胺酶的检测：MIC≤0.12 μg/ml ；Zonediameter ≥29 mm。
       接种纯菌落于琼脂上；贴β-内酰胺类纸片 (例如,苯唑西林, 头孢西丁)；孵育过夜；测试抑菌圈周围的细菌；如果β-内酰胺酶阳性,报告青霉素R。

超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）
       ESBLs是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素类和单环内酰胺类氨曲南的一类酶；ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物，能被克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等酶抑制剂所抑制；ESBLs主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也见于肠杆菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、沙雷菌属等其他肠杆菌科细菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌。
       纸片法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL （筛选阳性）：头孢泊肟≤17mm,头孢他啶≤22mm,头孢噻肟≤27mm,头孢曲松≤25mm,氨曲南 ≤27mm 纸片法（表型确认试验）头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。
       任一复方制剂的抑菌圈直径与相应单药抑菌圈直径相差≥5mm时，即可判断该菌产ESBL。
       仪器测定法：Vitek,和BD-PHOEMXTM微生物分析仪均可测试ESBLS。
       分子生物学技术（PCR、DNA探针等）及分析酶底物谱及抑制物谱、生物化学技术等检测技术可对ESBLS做出确诊。

AmpC酶
       是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素的Ⅰ型β内酰胺酶，可分为诱导酶和非诱导酶，与ESBLs不同的是，AmpC酶对三代头孢菌素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制剂克拉维酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。
       头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法：将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上，在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在距纸片边缘25px处，用无菌手术刀片切75px长度的小槽，将待测菌株的6个菌落接种于槽内(勿溢出槽外)，35℃孵育18-24h，结果观察：若抑菌圈向内凹陷，即AmpC酶阳性。除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。
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