抗核抗体实验室检测

财小弟

<p>[摘要] 目的 讨论抗核抗体实验室检测的质量保证。
方法 针对目前常规实验室中抗核抗体检测两种主要方法，间接荧
光显微镜检查和微量滴定酶免疫分析方法在质量保证上存在的问
题，查阅相关文献，参考美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）
I/LA2-A2文件相关内容，结合临床应用实际情况进行总结归纳。
结果 总结了抗核抗体实验室检测常用方法间接荧光显微镜检查以
及微量滴定酶免疫分析方法质量保证中应该注意的问题以及保证质
量的过程，同时讨论了抗体的量，参考区间以及报告检测结果，实
验室内质量控制以及参考制备物等内容。
结论 帮助实验室及进行抗核抗体检测中提高检验的质量，为临床
和患者服务提供更好的品质。
[关键词] 抗核抗体参考制备物；抗核抗体；自身抗体；酶免疫分
析；间接免疫荧光；核抗原；质量保证。
抗核抗体的检测试验有助于几种系统性风湿性疾病的评估，比
如系统性红斑狼疮（SLE），盘状红斑狼疮，混合性结缔组织病
（MCTD），系统性硬化症，干燥综合症，多发性肌炎，皮肌炎以
及类风湿关节炎。已经证实了自身抗体的识别可用到这些疾病的诊
断、管理以及治疗中。针对目前临床实验室常规检测抗核抗体的方
法（间接免疫荧光试验（IF）和酶免疫测定试验（ELISA））的质
量保证过程，进行了以下总结。
一、抗核抗体检测间接免疫荧光试验（IF-ANA）
1. 介绍
IF-ANA为抗核抗体（ANA）检测的常用技术。IF-ANA试验可用于检
测广泛的自身抗体，并且通常用作为ANA重要的筛查试验。
可使用的底物种类很多，比如有小鼠肝脏或肾脏的冰冻组织，以及
最近的培养细胞。当前，培养的HEp-2上皮细胞（人喉癌，美国菌
种保存中心（ATCC?a CCL23））是使用最广泛的细胞。EHp-2细胞
的核和核仁都很大，核和核仁的染色类型可以很好的辨认出。
HEp-2细胞分裂得很快，可以在底物准备的时候见到其分裂相。这
样可以通过自身抗体唯一针对分裂细胞的结构将其检测出。HEp-2
细胞（ATCC?a CCL23）可以在实验室内生长，具有HEp-2细胞的显
微镜载玻片可以从供应商处获得。大多数HEp-2试剂在IF-ANA筛查
试验中有着可靠的结果。一些ANA有着较宽范围的灵敏度，这是由
于使用的固定程序的变异所致。所有商品化的试剂盒在说明书中应
该要提供一些与其灵敏度有关的数据。
IF-ANA试验适当的标准化以及质量保证依赖于校正的参考标准。参
考血清可以从世界卫生组织和CDC处获得。
1.1 IF-ANA试验原理
Coons和Kaplan首次描述了IF-ANA试验使用间接荧光抗体技术。
（1）将4微米的组织部分（冰冻切片组织比如小鼠肾脏）或是
HEp-2组织培养细胞固定于显微镜玻片上用作为核抗原的来源。
（2）将分析量定量的血清（如10或20μL）添加到单个的组织底物__
中，实验室温度下放置30分钟。将已知ANA-阳性和ANA-阴性的质
控血清添加到玻片上与之不同的底物槽内。
（3）冲洗载玻片，添加荧光结合物，孵育30分钟。
（4）冲掉多余的荧光结合物，在玻片上添加上封闭剂，盖玻片仔
细地盖紧。
（5）使用免疫荧光显微镜检查玻片。
1.2 病人标本及采集程序
血清是推荐的IF-ANA试验标本。如果需要延长储存时间，推荐使用
如叠氮化钠等防腐剂。血清可以在4℃下储存2-3天。假如需要延长
储存时间，可以将其储存在-70℃下。
2. 底物和固定剂的变异
推荐使用最广泛的底物是HEp-2细胞。有报告底物的固定可以通过
多种方法，比如甲醇-丙酮、丙酮或多聚甲醛。
某些核抗原——如DNA,组蛋白，Sm，核RNP以及SS-B/La——在大多
数细胞中含量丰富。因此，不管试验中使用的是何种底物，针对这
些抗原的抗体可以被很容易地检测出。与之相对的，另外有一些核
抗原——如SS-A/Ro，PCNA,RANA以及Ku抗原——在某些组织中的含
量很低。因此，没有单一的底物是最好的可用于检测所有ANA。
2.1 底物组织的固定
IF-ANA试验中使用的底物固定试剂推荐使用丙酮或酒精-丙酮。
底物没有固定可能会导致某些核抗原，如SS-A/Ro和nRNP，在冲洗
步骤中被洗脱掉，这样本应该是高滴度的ANA被检测为阴性或低滴
度。
在核蛋白（NP）固定之前冲洗底物，或单独使用乙醇或甲醇进行底
物固定，可能会使SS-A/Ro抗原发生溶解。
2.2 SS-A/Ro 抗原
当在底物中使用小鼠或大鼠组织时，SS-A/Ro抗原的量是无法检
测出的。但是，当固定在丙酮中的底物是人上皮样细胞株时，如
HEp-2细胞或KB细胞，可以定量检测出SS-A/Ro抗原。
B y l u n d和Na K a m ura在完成了