荧光染色法检测痰中结核杆菌的应用

孔雀明王

                                                                 内蒙古自治区呼和浩特市结核病防治所检验科     刘彬，陈小舟
       摘要：目的  观察探讨荧光染色法检测痰中结核杆菌的灵敏度、特异性及准确率，总结其临床应用价值。方法  选取经病理诊断为结核病的患者68例，对其进行荧光染色法检测，观察荧光染色法检测结果的符合率。结果  68例患者经荧光染色法检测，与病检结果对照，符合率为92.6%(63/68)，敏感度为100%，特异性为92.6%，敏感度与病检结果相比差异不显著(P>0.05)，无统计学意义；特异性与病检结果相比有一定差异(P<0.05)，具有统计学意义。63例荧光染色法检出阳性的标本平均读片时间为(31±0 5)s。结论  荧光染色法检测痰中结核杆菌的灵敏度高，特异性与准确率也较高，尤其适用于对结核病进行临床初筛中。
       关键词：荧光染色法；痰中结核杆菌；灵敏度；特异性

       对于结核病的诊断，临床多使用x 线、细菌培养、痰涂片镜下检查、病理切片等，但病理切片耗时长，痰涂片、细菌培养的敏感性及特异性低，x线对无典型影像学表现患者有局限性，在临床早期诊断中，皆有不足[1]，本文通过观察探讨荧光染色法检测痰中结核杆菌的灵敏度、特异性及准确率，总结其临床应用价值如下：
1 资料与方法
       1．1 一般资料  选取我院2010年6月～2012年6月经病理诊断为结核病的患者68例，对其进行荧光染色法检测，以病检结果作为金标准，观察荧光染色法检测结果的符合率。其中男29例、女39例；年龄21～67岁，平均年龄(40±2.3)岁，病检结果显示镜下可见典型的结核结节；本研究病理检验结果均由我市某院病理科提供，特此感谢。
       1．2 方法
       1．2．1 标本处理  依据痰标本盒上的编号对应使用铅笔在实验玻片的磨砂端上注明实验的编号，每份标本准备1张实验玻片；以竹签尖端挑取痰标本中呈脓样、干酪样等较可疑的部分均匀地将其涂抹在玻片上，痰膜大概呈2cm x 1cm 的卵圆形；将涂好的痰涂片放置在室温下待干燥后5s，再将其穿过酒精灯火焰的上方，约进行4次后可将其固定。
       1．2．2 染色方法  初染：把固定好的玻片放置在染色架上，然后滴入0.1%的金胺O染色液，将玻片覆盖满，常温下放置15-20min；脱色：以自来水将初染液轻轻冲去，然后滴人脱色液，将其脱色，约2min左右；复染：以自来水将脱色液轻轻冲去，然后滴人0.5%的高锰酸钾复染液，将玻片覆盖满，约1min后，再以自来水将复染液轻轻冲去，沥干玻片的水分后，晾干。
       1．2．3 读片  使用LED荧光显微镜，选择40x 的物镜下调节焦距进行观察，在暗背镜下可见结核杆菌会发出黄绿色的荧光，其形状呈现为杆状稍微弯曲。
       1．2．4 报告结果  符合0条/100视野，则为荧光染色抗酸杆菌阴性(—)；符合1～9条/100视野，则为荧光染色抗酸杆菌阳性(+)；符合10～49条/50视野，则为荧光染色抗酸杆菌阳性(1+)；符合1～9条/视野，则为荧光染色抗酸杆菌阳性(2+)；符合10～99条/视野，则为荧光染色抗酸杆菌阳性(3+)；符合超过100/视野，则为荧光染色抗酸杆菌阳性(4+)[2]。
       1．3 统计学方法  本文检测结果的数据采取卡方软件V 1.61版本统计和分析，组间对比使用的是X2 检验，%作为计量单位，P<0.05认为差异显著，有统计学意义。
2 结果
       68例患者经荧光染色法检测，与病检结果对照，符合率为92.6%(63/68)，敏感度为100%，特异性为92.6%，敏感度与病检结果相比差异不显著(P>0.05)，无统计学意义；特异性与病检结果相比有一定差异(P<0.05)，具有统计学意义。63例荧光染色法检出阳性的标本平均读片时间为(31±0.5)s，见表1。

3 讨论
       本研究中统计可见，采取荧光染色法检测，与病检结果对照，符合率为92.6%，敏感度为100%，特异性为92.6%，敏感度与病检结果相比差异不显著；特异性与病检结果相比有一定差异。本研究还统计可见，63例荧光染色法检出阳性的标本平均读片时间为(31±0.5)s，提示其检测出结果速度快，能够满足临床大量标本初筛及迅速出结果以供临床早期对症治疗的要求，主要是由于荧光染色仅需要采取40x 的高倍镜下观察，即可看到视野的大面积，对阴性结果的判读，仅需选取100个视野内无发现杆菌即可，显著加快了镜下检查的速度，判读和报告结果变得简单、快捷[3]。除外，荧光染色法还具有标本处理较以往镜检处理步骤简化，可显著地节省实验员的检测时间，减少操作中的T作量，实用性强。
参考文献：
[1] 卫生部疾病控制司．中国结核病防治规划实施工作指南[M]北京：中国协和医科大学出版社．2009：3-6．
[2] 中国疾病预防控制中心．中国结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册[M]北京：中国协和医科大学出版社，2009：7-9．
[3] 张小芬，曾希鹏，刘平．荧光染色LED显微镜查找痰中结核杆菌的应用[J]中国卫生检验杂志，2010，20(12)：3286-3287．
                                                                                                                                        编辑：范伟伟