临床标本的念珠菌感染分类和药敏分析

孔雀明王

                                                                                                                    武警湖北总队医院    靖杰
       【摘要】 目的 了解医院念珠菌感染的病原菌分类及药敏分析。方法 各种临床标本经分离培养后，用改良纸片法测定标本分离的各类念珠菌对氟康唑的敏感性。 结果 临床念珠菌感染中以白念珠菌为主(52.0%)，热带念珠菌（17.2 %），光滑念珠菌（10.1%），克柔念珠菌（9.4%），其他念珠菌（11.4 %）。非白念珠菌感染呈上升趋势。两性霉素、制霉菌素耐药率最低，分别为6.1 %、3.4%，其次为伊曲康唑(17.0%)，氟康唑耐药率最高(57.1 %)，克柔念珠菌是耐药性较强的念珠菌，其次是光滑念珠菌、热带念珠菌；非白念珠菌与白念珠菌相比耐药率有显著差异。结论 临床标本的念珠菌感染呈上升趋势，应加强念珠菌的检测和耐药性分析，临床经验用药应依据药敏结果合理选用。
      【关键词】 念珠菌 药敏试验

       随着广谱抗生素、激素和免疫抑制剂的广泛应用，念珠菌引起患者医院感染日益增多，患者往往有严重的基础疾病，并长期使用抗生素，由于条件致病性念珠菌感染病例不断增多，又使得念珠菌治疗后的耐药问题日渐突出。我们对2005年1月～2007年 11月呼吸道分离的437株念珠菌菌种及药敏结果进行分析，现报道如下。
1 材料与方法
       1.1 试验菌株 收集2005年1月～2007年11月我院住院患者临床标本中分离的437株念珠菌。
       1.2 质控菌株 白色念珠菌ATCC64548（S），白色念珠菌ATCC64550（R）。
       1.3 真菌药敏琼脂及药敏纸片 氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B、制霉菌素、5-氟胞嘧啶等5种药敏纸片及改良Shadomy琼脂平板均购自丹麦Rosco公司。
       1.4 培养与鉴定 菌落分离于沙保弱琼脂培养基(自制)，科玛嘉显色培养基(郑州博赛科技有限公司)，鉴定API系统20C AUX试条（法国生物梅里埃公司生产）。
       1.5 药敏试验 (1)接种液的配制：挑取单个菌落于无菌盐水，调制成为5×105CFU/ml的菌悬液，再用生理盐水1∶1稀释。克柔念珠菌先配成5×105CFU/ml的菌悬液，再用生理盐水 1∶10稀释。(2)按试剂说明书所提供的方法和标准进行操作。 Shadomy琼脂培养：先置35℃干燥20～25min，对于9cm平皿吸 0.5ml 接种液，14cm吸1.0ml 接种液，倾注于平板表面，涂布均匀，用移液管吸走多余液体，然后，平板在35℃干燥10min，贴药敏纸片，培养18～24h后判读结果。抑菌圈判断敏感（S）≥ 20mm，剂量依赖性敏感（SDD）12-19mm和耐药（R）≤11mm。真菌纸片药敏的质控，白色假丝酵母菌ATCC64548对氟康唑的抑菌环为36-42（S），白色假丝菌酵母菌ATCC64550为11-17 （R）。
2 结果
       437株念珠菌鉴定白念珠菌占52.0% (227/437)，光滑念珠菌占10.1% (44/437)，热带念珠菌占17.2% (75/437)，克柔念珠菌占9.4% (41/437)，白念珠菌的检出率明显高于光滑念珠菌。
3 讨论
       各种临床标本中真菌的检出率以痰液最高，而且我们还发现，大多为混合感染或继发于其他细菌感染。白色念珠菌是临床常见的条件致病菌，抗生素的滥用及免疫抑制广泛使用使得念珠菌的感染机会逐渐增加。近年来，人类念珠菌感染有由白念珠菌转向其他非白念珠菌感染的趋势［1］。本研究非白念珠菌感染占 47.9%，这也与国内、外的报道一致［2］。有文献报道，氟康唑对克柔念珠菌引起的感染疗效略差，与我实验相符，伊曲康唑对热带念珠菌疗效不佳［3］。随着氟康唑应用的日益广泛，导致念珠菌症向非白念珠菌症变迁，且那些感染菌对抗真菌药物的耐药率明显高于白念珠菌，非白念珠菌与白念珠菌对抗真菌药物的耐药率相比有显著差异。我们还发现，多重感染的患者长期接受抗真菌药物治疗，使其对常用抗真菌药物敏感性降低，出现念珠菌的多重耐药现象，导致少见的致病性真菌寄生和感染现象增加。痰标本中437株念珠菌对5种常用抗真菌药物的耐药率显示，两性霉素 B和制霉菌素的耐药率最低(3.4%～6.1%)，伊曲康唑其次，氟康唑的耐药率最高(57.1%)。氟康唑不良反应小，较安全，能广泛渗透体液组织器官，对念珠菌属、隐球菌属感染疗效较好，目前临床广泛使用，部分念珠菌已出现耐药，白念珠菌尽管有较多菌株对氟康唑耐药，但对其他抗真菌药物的敏感性仍然较好，因此，将临床分离的念珠菌鉴定至种水平，对临床抗真菌感染治疗有着重要的指导意义。建议有严重免疫功能低下的患者，应避免长期使用唑类药物。
参考文献
[1] 王文莉，王端礼. 念珠菌对咪唑类药物耐药现象的研究现状[J].国外医学皮肤性病学分册，1996，22.
[2] 陶风蓉，宣天芝，张秀珍. 用E-test方法监测酵母样真菌对氟康唑的耐药性[J].中华医学杂志，2002，12(18)：632.
[3] 王苏建，王友良. 真菌血症18例微生物学及临床分析[J].中华医学检验杂志，1999，22：97.
                                                                                                        编辑：范伟伟