白色念珠菌的生长曲线和世代时间测定

Q伯爵

       白色念珠菌是引起临床上深部真菌感染常见的病原菌，80％以上AIDS患者受真菌尤其是白念珠菌感染比较常见，深部真菌感染已成为许多疾病的主要死亡原因之一。测定白色念珠菌的生长曲线对了解其生长规律从而选择合适的药物有非常重要的作用。本研究用比浊法和活菌计数法测定白色念珠菌的生长曲线和世代时间，并探讨了两种方法的优缺点。
1 材料和方法
1.1 一般材料
      1.1.1 菌株：白色念珠菌Cla，购自中国医学真菌保藏中心。
      1.1.2 主要仪器试剂：HZQ—X100A型恒温振荡培养箱为上海一恒科学仪器有限公司产品；7230G型分光光度计为上海分析仪器厂；SN-CS-2D单人净化工作台为苏州净化设备厂；改良沙堡氏液体培养基为北京奥博星生物技术责任有限公司产品。
1.2 方 法
       1.2.1 真菌细胞培养：在超净工作台内用接种环挑取4℃冰箱保存的菌株接种于含45ml 改良沙堡氏液体培养基的三角烧瓶中，置恒温摇床振荡培养(30℃ 150 r／min)，过夜。将培养过夜的培养物用血细胞计数板计数并用灭菌改良沙堡氏液体培养基调整菌液浓度为5 X 104 cfu／ml。
       1.2.2 测OD530值、活菌计数：用微量加样器分别吸取上述10ul 接种菌液加入含180 ml 改良沙堡氏液体培养基的三角烧瓶中，置恒温摇床振荡培养(30℃，130 r／rain)。从培养0h 时起及以后，每隔2 h取菌测OD值，并进行活菌计数，培养12 h及以前的菌液取10-2 ～10-9 稀释度、培养12 h及以后的菌液取10-4～10-11 稀释度各100ul 用灭菌三角涂棒涂布于90 mm直径的沙堡氏平板上，30℃培养48 h，计算活菌浓度cfu／ml，以各培养期的细菌数对数为纵坐标，时间为横坐标，作图绘制生长曲线，取对数生长期中的一段按下式计算世代生长时间：

2 结果
       在培养条件不变的情况下，定时取样测定其在530 nm处的OD值，然后以时间为横坐标，OD的对数为纵坐标可形成一条生长曲线。这条曲线可分为：迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。

       在培养条件不变的情况下。定时取样接种到培养基中然后计算细菌数，如以时间为横坐标，细菌数的对数为纵坐标可形成一条生长曲线。这条曲线反映出细菌从开始生长到衰亡的过程。整条曲线可分为四个时期：迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。

       白色念珠菌生长的迟缓期为0～16 h，对数生长期为16～30 h，之后进入稳定期和哀退期。计算取平均值知白色念珠菌的世代生长时间为132.5 min。

3 讨论
       细菌的生长指细菌有规律的增长，包括细菌体积的增大，代谢功能的完善及细菌数量的增多。不同的菌种有其各自不同生长规律。生长曲线是细菌在培养中所表现出来的生长和繁殖的规律，不同的细菌可表现出不同的生长曲线，同一种细菌在不同的培养条件下，其生长曲线也不同。
       在对细菌进行各种特性的比较研究时，这条曲线有助于选定生长状态一致的细菌，一般选择对数生长期末、稳定期初始阶段的细菌，因为此阶段的细菌无论从生物学特性以及代谢活性上都是最典型的，这样就可使实验结果更可靠。本实验显示白色念珠菌生长的迟缓期为0～16 h，对数生长期为16～30 h，之后进入稳定期和衰退期，因此在对白色念珠菌进行研究时，我们一般选取培养24～28 h的培养物进行研究。
       本实验用比浊法和活菌计数法两种方法测定了白色念珠菌的生长曲线，并计算了世代生长时间，用两种方法测出的细菌对数期基本一致，其世代生长时间为132.5 min。OD法测定结果在34～54 h时曲线比较平稳，稳定期较长，而用活菌计数法则发现稳定期较短，为32～48 h，培养48 h后细菌数量明显降低，细菌生长进人衰退期。两种测定方法之所以出现如此的不同是因为比浊法OD值反映的是总菌浓度，而在对数生长期细菌的数量呈指数增加，死亡菌数很少可忽落不计，而在稳定尤其是衰退期，有大量细菌死亡，活菌数逐渐减少而总菌数基本稳定这就造成了两种实验方法绘制的生长曲线反映的稳定期、衰退期时间阶段不同。因此，我们在进行细菌的生长曲线的绘制及计算世代时间时，应以活菌计数法为准。

                                                                                                            编辑：范伟伟