酶标仪单、双波长检测的比较

司徒凌楚

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。

一 材料和方法

1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的移液器。

2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。

3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。

二 结果

1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。

2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。

表1 酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果

酶标仪	BIO-RAD550	ST-360
波长	450nm	450nm+655nm	450nm	450nm+630nm
最小值	0.125	0.126	0.130	0.131
最大值	0.154	0.139	0.153	0.141
均值	0.1356	0.1329	0.1399	0.1361
标准差	0.00671	0.00267	0.00467	0.00247
CV（%）	4.94	2.01	3.34	1.82
最大值/最小值	1.232	1.103	1.177	1.076

表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果
<P>[table][tr][td=1,1,85]波长
[/td][td=2,1]450mnm
[/td][td=2,1]450nm+630nm
[/td][/tr][tr][td]
[/td][td=1,1,68]1
[/td][td=1,1,79]2
[/td][td=1,1,84]1
[/td][td=1,1,79]2
[/td][/tr][tr][td]最小值
[/td][td]0.130
[/td][td]0.129
[/td][td]0.131
[/td][td]0.131
[/td][/tr][tr][td]最大值
[/td][td]0.153
[/td][td]0.152
[/td][td]0.141
[/td][td]0.141
[/td][/tr][tr][td]均值
[/td][td]0.1399
[/td][td]0.1391
[/td][td]0.1361
[/td][td]0.13711
[/td][/tr][tr][td]标准差
[/td][td]0.00467
[/td][td]0.00495

13636600006

顶！！！！！！！！！