酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响

海风100

全自动酶联免疫系统与酶标板板型不合对结果的影响及对策

桑列勇 蒋国瑾 朱飞燕绍兴市中心血站 浙江绍兴312000
关键词：酶联免疫系统；检测；影响
随着对血液安全要求的提高，血液检测设备得到不断更新和完善，全自动酶联免疫系统因具有检测稳定、数据客观的特点而作为基础装备在血站得到了普遍使用。但我们在使用BEPIII全自动酶联免疫系统进行抗人类免疫缺陷病毒（HIV）检测时，发现用某国外进口抗HIV检测试剂易出现以下现象，即每板结果中阳性或处于灰区的弱阳性较多，经复检后大多为阴性。为此我们分析原因，并尝试解决方法。
一、材料和方法
1．标本来源 本站2005年3月至4月无偿献血标本2 836人份。
2．试剂和仪器 抗HIV(国外进口试剂)；试剂1、2、3、4均为国内常用的抗HIV 酶免试剂；TECAN RSP150全自动加样系统（德国TECAN公司）；BEPIII全自动酶联免疫系统（德国贝灵公司）；BEPIII控制软件：BEP3.1.2e(仪器自带)。
3．标本检测 按照试剂和仪器使用说明书操作。
4．洗板模式板型的调整 游标卡尺准确量取各酶标板高度和孔深度，相减后即为各酶标板孔底高度，根据测量结果对照仪器板型参数重新设置板型。
二、结果
1．用国外进口抗HIV试剂检测时发现，一些标本第1次呈阳性或弱阳性反应，但第2次双孔复检为阴性。这些呈阳性或弱阳性反应的孔位与用其他试剂检测中的花板不同，有一定的规律性，主要出现在酶标板的A孔。拍干酶标板后对呈阳性反应的A孔孔底观察，可见1至数条明显划痕。检测的1 255份标本中共发生这类现象的标本25份，占总检测量的1.99%；而在这些标本中处于A孔的标本21份，占全部出现此类现象孔数的84%。
2．各酶标板高度测量结果和BEPIII板型板底高参数分别见表1、2。

三、讨论

从国内外的各种报道中我们常可以看到，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测时出现假阳性，主要是由于洗板不彻底[1、2]、光照造成底物显色[3]而造成的。而在本研究抗HIV检测中发生的假阳性，是由于忽视了BEPIII洗板头位置引起的。现有的国内外小洗板机的洗板头，一般是采用不固定洗板头的方法，借动力提升和重力这2个力交互作用使洗板头上下运动；而BEPIII的洗板头位置由齿轮咬合定位，皮带带动洗板头上下运动。前者在吸液时受重力作用下落，用力较轻，一般不会造成酶标板底部的划伤；而后者由于位置固定，当定位低于板底高度时，受强力作用极易造成底部划伤。酶标板底部划伤破坏了光滑的表面，使酶结合物非特异性结合在酶标板上，最终导致容易出现假阳性结果；而且与连接点最近的第1孔（即A孔位）受力最大，极易造成A孔板底部划破。因此我们在全自动酶免检测中不但要根据试剂功效比做好筛选工作，还应该根据试剂的自身参数设计好一套比较适宜的程序，尽量减少因仪器装置与试剂盒提供的酶标板冲突造成的板底划痕等情况，以更好地提高检测质量和效率，减少不必要的重复测试；尤其是在增加检验项目或者更换其他品牌试剂盒时，应准确测量板高、孔深、孔直径、孔形等数据并及时输入仪器中，使新试剂与仪器能够正常匹配。我们认为生产商应该尽量统一试剂板型，同时在说明书上对板型加以说明，防止该类情况的发生。
参考文献

[1]侯建华，陈林琴.血液检验室内质控存在的若干问题及其对策[J] .中国输血杂志，2000，13（1）：56-57.
[2]胡遴，尤凤光，丁茂金，等.酶联免疫一步法检测乙型肝炎病毒表面抗原假阳性若干问题探讨[J] .中国卫生检验杂志，2001，11（6）：731-732.
[3]邓晓琴.光照对ELISA试验结果的影响[J].临床输血与检验，2003，5（2）：51-52.