链球菌属的特性及其检验

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【摘要】目的：总结链球菌属的特性及其检验技术，结合临床经验，进一步提高细菌分离及鉴定水平。方法：采用显微
镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。结果：根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球
菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌；按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D等
20个群。结论：链球菌是I临床常见的致病菌，正确掌握检验方法，科学地分离和鉴定，有助于临床做出合理的诊治决策。
【关键词】链球茵属；特性；分离培养；生化反应；血清学试验

      链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部，大多数不致病。其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌。可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。另外草绿色链球菌为条件致病菌。因此，本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一，临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。现将本属的特性及其检验总结如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
      本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例，合计4247例。其中门诊患者样本239例。住院患者样本4 008例。细菌培养阳性结果1475例，阳性率为34．73％。其中链球菌属阳性83例，占5．63％。
1.2 检验方法
      根据不同疾病采集不同标本。
1.2.1 显微镜检查  咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色．镜检见链状排列革兰阳性球菌可初
步报告，及时供临床参考。
1.2.2 分离培养  血液标本需要先增菌培养。脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。链球菌属初代分离需5％C02，35℃24 h观察菌落性状。菌落太小可延长观察时间。
1.2.3 鉴定  根据菌体形态、菌落形态、溶血特征以及下列鉴定试验进行。
1.2.3.1 杆菌肽敏感试验方法：用棉拭子将待检菌均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0．04 U的杆菌肽纸片，置35℃
孵育18-24 h。观察结果。A群链球菌为阳性，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药．此法可作为筛选试验。
1.2.3.2 CAMP试验。无乳链球菌能产生CAMP因子，可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌沿直径划线接种。再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔3—4mm。35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
1.2.3.3 Optoehin试验方法：挑取待检菌密集划线接种在血琼脂平板上，贴放Optoehin纸片(5ug/片)，35℃孵育18～24 h，
观察抑菌环大小。Optoehin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑
制该菌的生长，故肺炎链球菌对它敏感，而其他链球菌对其
耐药。肺炎链球菌抑菌圈直径常大于14mm。
1.2.3.4 胆汁溶菌试验：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解自溶。在血琼脂平板上选择出待检的菌落。观察记录菌落特点，然后于菌落上加1滴100玑去氧胆酸钠溶液，35℃孵育30min观察结果。肺炎链球菌为阳性，表现为菌落消失。
2 结果
2.1 链球菌属的特性
2.1.1 形态与染色菌体呈圆形，直径为0.8一1.0 um，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。革兰染色阳性。无鞭毛、无芽胞。某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。肺炎链球菌呈矛头状。
2.1.2 培养特性本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高。在含血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等的培养基上生长良好。最适温度为35—37℃，最适pH为7.4—7.6，在5％CO2环境下生长更好。在液体培养基如血清肉汤中．溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。上层液体澄清，可有菌膜。不溶血菌株则均匀浑浊生长。在血琼脂平板上，经35℃18—24 h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.10-0.75 mm的细小菌落。菌落周围出现不同溶血环。
2.1.3 生化反应本属细菌触酶试验阴性，能分解葡萄糖产酸不产气，对其他糖类的分解因不同菌株而异。
2.2分类
      链球菌在血平板上的溶血现象以及血清学分类仍是目前鉴定链球菌的常规使用方法。
2.2.1 根据溶血现象分类①甲型溶血性链球菌：菌落周围有1~2 mm宽的草绿色溶血环，又称草绿色链球菌。②乙型溶血性链球菌：菌落周围有2~4mm宽的透明溶血环．又称溶血性链球菌。③丙型链球菌：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
2.2.2 根据抗原结构分类链球菌的C抗原为群特异性抗原。位于细胞壁。根据C抗原的不同，可分成A、B、C、D等20个群。对人体致病的90％属A群。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型；B群分4个型。
2.3 致病性
      根据临床经验表明．A群链球菌致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。B群链球菌学名无乳链球菌，是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人可引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用。草绿色链球菌是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎冈。
3 讨论
      咽拭标本采集后应置液体运送培养基中。避免标本干涸。痰液和脓液标本采集量不应低于1 ml，并置无菌容器中运送。主要是避免杂菌污染。实验室接到标本后应立即进行检查和接种，否则应置于-4℃保存，且时间不应超过24 h。肺炎链球菌感染的患者早期表现为菌血症，血培养阳性率较高。因此应在患者畏寒、发热时，尤其是在临床医生使用抗菌药物前及时抽血送检培养。对肺炎链球菌感染的患者来讲，血培养的敏感性、阳性率和特异性均大于痰培养，其临床价值是后者无法比拟的。
      随着生物工程技术的迅猛发展，链球菌属的其他非培养检验方法也不断被开发和应用。如今直接从临床标本中检测链球菌特异性抗原和核酸的多种商品化试剂盒可供选用。检测方法主要是采用胶乳凝集、酶免疫测定和核酸探针等，可直接从咽拭子标本中检测化脓性链球菌，从泌尿生殖道拭子标本中检测无乳链球菌。从其它体液标本中检测C群链球菌和肺炎链球菌的特异性抗原和核酸，有助于临床早期对这些链球菌做出合理诊治决策。
      结果评价及报告。乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌系毒力强的致病菌，因此无论从任何标本中分离到并鉴定后均应报告临床。及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌．有利于临床早期进行适当的抗菌治疗以减少严重后发症的发生，如风湿热和肾小球肾炎的产生。草绿色链球菌在重症感染．如败血症和心内膜炎时应考虑鉴定到种一级。从脓液标本和创伤感染部位等处分离出的米勒链球菌组多为病原菌而非污染菌。链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。
      近年来．已发现对Optochin耐药的肺炎链球菌。因此，若抑菌圈直径较小。应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。除A群链球菌外，少数约6％的B群链球菌及10％-20％的C群和G群链球菌对杆菌肽亦呈敏感，可借生化实验加以区分。链球菌药物敏感试验中，一般对青霉素、红霉素、头孢菌素、万古霉素、四环素及磺胺类敏感。
                                                                                                                                   本文编辑：范伟伟