酶标板法测定ALT的内部质量控制

大山

　　100088 北京红十字血液中心 高东英 朱家明 王梅华 李燕 吴硕 刘彦

  　　酶标板法测定ALT的原理是速率法，其实验参数是根据IFCC推荐的方法和郭兑山的研究报告建立的[1]。该方法操作简单、自动化程度高、设备性能价格比适中，尤其适用于大量标本的检测。但实验过程中的影响因素较多，为保证质量 ，提高测定结果的准确性，我们除参加卫生部临检中心和全国血液质量管理委员会的室间质评外，还开展了ALT的室内质量控制，现将结果报告如下。
  　　1.材料与方法
  　　1.1 试剂 ALT基质液、定值血清（高、中、低值）及临界值质控血清（医学决定水平）均购自中生公司。
  　　1.2 仪器 奥地利Anthos HT III型酶标仪；日本HITACHI 7170型全自动生化分析仪；美国 IEC Centra CL3型离心机。
  　　1.3 实验条件 测验波长340nm，参比波长405nm，测定室温度37oC，延迟时间90s，测定次数6次，测定间隔60s，样品及试剂用量分别是30ul、210ul。离心条件：3000rpm/30s。室温18~25oC。
  　　1.4 室内质控程序
  　　1.4.1最佳条件下已知质控血清变异(OCV)的测定 选择本实验室中素质高、操作熟练的技术人员进行测定，选用新的进口的酶标板及新的加样吸头，在最佳条件下检测临界值质控血清至少20次，求出OCV的均值和标准差，该值就代表本室的最佳工作质量。
  　　1.4.2 确定暂定靶值、暂定控制限 将OCV的均值作为暂定靶值，OCV标准差的±3SD作为暂定控制限，连续测定一个月。一个月结束时，将该月的数据汇集在一起，计算靶值和标准差。
  　　1.4.3 下一月靶值和标准差的确立 每月结束时所获得的靶值和标准差一般都会有一定程度漂移。如果该漂移只有很小或根本没有临床意义，则据此可修改原靶值和控制限。否则，应查找原因，并沿用原靶值和控制限。
  　　1.4.4 绘制质控图 根据1.4.2和1.4.3确定的靶值和控制限作质控框架图，以检测批次为横坐标，ALT值为纵坐标，在纵坐标中分别点出x、x±2s、x±3s，再画出与横坐标平行的五条虚线，即绘成质控空图。
  　　2. 结果
  　　2.1 OCV用上述方法进行测定，OCV的 n=22 x=41.22 s=1.004 cv=2.4%
  　　2.2 质控结果举例
  　　98年7月 n=166 x=41.28 s=1.24 cv=3.01%
  　　98年8月 n=144 x=41.13 s=1.03 cv=2.49%
  　　98年9月 n=183 x=40.91 s=1.18 cv=2.89%
  　　3. 讨论
  　　3.1 酶标板法测定ALT，最重要的影响因素是温度，Anthos HT III型酶标仪虽然有温度控制，但温度控制的精度（空载时，温波±0.2oC；测量时，温波±0.5oC）和对反应体系温度控制的方法（空气加热）均不如经典的生化分析仪，所以，该方法对环境温度有一定的要求，最好在18~25oC之间。样品、试剂和质控血清均需用预先平衡至空温。
  　　3.2 质控血清 血站面对的检测标本多数是合格标本而且只要求判断标本是否符合标准化（37oC 40IU），所以，只设一个临界值（医学决定水平）质控即可，若该方法用于医院，则必须设临界值和高值（病理标本）两个质控。质控血清使用前必须混合均匀。
  　　3.3 定值血清必须不定期校正，防止不可预见的因素造成的定值偏移。
  　　3.4 标准曲线 经近49354份标本、649块板的检测，我们发现：649条标准曲线的相关系数均大于0.997。故实验参数中“最小相关系数”定为0.995。另外，标准曲线的斜率是影响实验准确性及精密性的重要因素，应加以控制。
  　　3.5 质控规则的确定 根据OPSpecs图方法确定质控规则。
  　　3.5.1根据“美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求”确定ALT检测的总允许误差（TEa）为靶值±20%
  　　3.5.2 本实验室本方法的不精密度，以同一批质控物7、8、9三个月的不精密度的最大值计算。cv=3.01%。本实验室本方法的不准确性度，以卫生部临检中心质控物980336计算，Bias=2.56%。
  　　3.5.3 根据TEa、s、Bias,用“Westgard Validator”软件画出OPSpecs图。
  　　3.5.4 按照 OPSpecs图“就近、从简、从少、从小”的原则，确定控制规则为：±2.5SD0为失控限。
  　　3.6 质控图失控判断及处理 根据3.4所确定质控规则进行失控判断 。若出现失控，应及时上报科室负责人，由负责人作出是否发出与测定质控品相关的那批标本检验报告的决定。同时需查找失控原因，作好记录。
  　　通过开展室内质量控制工作，不仅对可能造成失控的系统误差、偶然误差、过失误差等进行了监控，确保了ALT实验结果的准确性，而且提高了技术人员对全过程质量控制（TPC）的认识，增强了自觉质控的意识。
  　　参考文献
  　　1 郭兑山，等。应用酶标仪快速测定丙氨酸氨基转移酶的活性浓度，中国输血杂志1998；11（2）:88