甲型H1N1流感病例的血液学特点及临床分析

财小弟

　　王剑超  张永为  马春芳  汪强   郑晓燕
  　　基金项目：浙江省教育厅基金资助项目（Y200805826）
  　　作者单位：浙江中医药大学附属第二医院检验科（王剑超  张永为 马春芳 汪强）；浙江衢州市人民医院检验科（郑晓燕）
  　　2009年在世界范围内暴发流行的甲型H1N1流感在临床特征、流行病学、病毒细胞基础研究等方面的研究已有较多报道。目前，临床上常用咽拭子分泌物的RT-PCR方法检测，但是由于甲型H1N1患者人数急剧增加，RT-PCR方法检测所需时间较长，费用较高，并且需要到疾病预防控制中心确诊，各医疗机构暂时无法为每一位发热患者进行甲型H1N1流感确诊试验。新一代美国库尔特LH750血球分析仪采用VCS（体积参数、传导性参数与激光散射性参数）技术对白细胞进行分类，能够灵敏反映各细胞的形态学变化，在细菌感染、病毒感染和寄生虫感染等方面有较高的诊断价值。
  　　1.对象与方法
  　　1.1　研究对象与分组
  　　甲型Ｈ1Ｎ1流感组：2009年10—11月期间，因流感样症状就诊、经RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒核酸阳性的确诊患者82例。所有患者均排除合并其他基础疾病和细菌感染。
  　　季节性流感对照组：选取有相似流感症状，经RT-PCR检测甲型H1N1流感病毒核酸阴性，临床抗病毒治疗有效，相应病毒血清学lgM抗体检测阳性病例60例。
  　　健康对照组：随机选取同期健康体检者60名。
  　　1.2 观察指标
  　　对三组研究对象的白细胞总数（WBC）、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、平均淋巴细胞体积（MLV）、淋巴细胞体积变异度（LVD）、平均单核细胞体积（MMV）及单核细胞体积变异度（MVD）分别进行观察。
  　　1.3 检测仪器、试剂和方法
  　　美国库尔特LH750全自动血球分析仪，所有试剂为原装进口试剂，用电阻抗法、高频电流和激光散射技术对白细胞进行计数和分类，并进行白细胞VCS参数分析。
  　　1.4统计学方法
  　　采用 SPSS 13.0软件，所有统计分析采用显着性水准ａ=0.05。
  　　2.结果
  　　2.1 各组血常规检测结果  82例甲型H1N1患者WBC平均总数为（5.67±1.82）×10９／Ｌ，与季节性流感组和健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；淋巴细胞的平均百分比为（17.82±6.32）%，较其他两组明显降低（P值均＜0.01）。甲型H1N1流感组的单核细胞平均百分比为（13.17±4.4）%，较其他两组明显增高（P值均＜0.01）。
  　　2.2  各组淋巴和单核细胞VCS参数检测结果  甲型Ｈ1Ｎ1流感组淋巴细胞的MLV、LVD与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），但明显低于季节性流感组（P＜0.01）；甲型Ｈ1Ｎ1流感组单核细胞的MMV和MVD明显高于其他两组（P值均＜0.01）。
  　　2.3 各组外周血白细胞比例与散点图形态  绿色为单核细胞群、蓝色为淋巴细胞群、粉红为中性粒细胞群、橙色为嗜酸粒细胞群。细胞群位置的高低反应了不同细胞体积的大小。与健康对照者比较，甲型H1N1流感患者的VCS散点图提示：单核细胞颗粒团增大，位置上移，而淋巴细胞细胞颗粒团变小；季节性流感患者的VCS散点图可见到淋巴细胞颗粒团增大。
  

  

　　注：(a)甲型 H1N1流感患者；

  

  

　　(b) 季节性流感患者；

  

  

　　(c) 健康对照者

  　　图1 甲型H1N1流感患者、季节性流感患者和健康对照者的白细胞VCS散点图
  　　3.讨论
  　　2009年3月起在全球爆发的甲型H1N1流感，尽管其临床症状与一般季节性流感相似，但传染性与病死率均高于季节性流感。在我国，由于受到医疗资源的限制，暂时无法为每一位发热患者进行甲型H1N1流感确诊试验，所以加强流行病学的调查研究及采用一些简捷、快速、方便的实验检测方法是非常有意义的。
  <P>　　本研究中血常规检测结果显示，甲型Ｈ1Ｎ1流感患者的WBC总数与季节性流感组和健康对照组比较差异无统计学意义。而对于淋巴细胞，甲型Ｈ1Ｎ1流感组在发热24h内淋巴细胞比例明显低于季节性流感组和健康对照组，这可能是因为甲型Ｈ1Ｎ1流感病毒能非选择性的抑制外周T淋巴细胞，使CD4+T细胞绝对值降低，提示甲型Ｈ1Ｎ1流感病毒可抑制机体细胞免疫；此外还可能与甲型H1N1流感病毒诱导外周血淋巴细胞凋亡有关。本研究还显示，甲型H1N1患者血常规中单核细胞百分比有所增高，这在之前的研究中较少见到类似报道，可能是因为单核巨噬细胞分泌相关蛋白质或细胞因子、趋化因子等抑制了甲型H1N1流感病毒对单核细胞的凋亡。Tyner等也发现甲型H1N1流感