SYSMEX系统全自动血细胞分析仪溶血素的研发

龙虎豹

                                              哈尔滨医科大学附属第四医院检验科     迟伟群，姚玉虹，师静霞，张超民
       [摘要] 目的  研制全自动血细胞分析仪溶血素并对之进行评价。方法  采用随机和不随机选择样本。并对自制溶血素的各项理化指标、相关性、精密度进行测定。结果  与进口溶血素相比，理化指标基本吻合。各项指标变异系数<5%。结论  自制溶血素在临床应用中可完全替代进口溶血素。
       [关键词]血细胞分析仪；溶血素；自制；相关性

       血细胞分析仪检测法是临床诊断工作中最常见的实验方法之一。血细胞计数自动化程度的不断提高为临床提供了更多更可靠的实验室指标，也提高了工作效率。近些年来，随着高科学技术的应用和基础医学的发展，特别是计算机技术的引用，各种类型的血液分析仪相继问世，检测水平不断提高，仪器的原理得到了很大的改观。即是由电阻抗法的三分群发展为多项技术联合同时检测一个细胞，综合分析试验数据，联合应用激光散射和过氧化物酶染色技术来进行白细胞分类计数。得出较为准确的白细胞分群结果。但由于白细胞分类、计数及血红蛋白含量的测定都必须使用成分配法合理的溶血素才能实现[1]，所以溶血素成为血细胞分析仪最为重要的一种试剂。长期以来鲜有国产溶血素的报道与应用，国内绝大多数医院完全依赖进口溶血素，而进口溶血素价格昂贵，必然会加重医院成本，增加患者负担。因此，我们研制出了一种效果较好的国产溶血素，同时与进口的溶血素进行了相关对照，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1．1 材料
       1．1．1 标本来源：对健康人新鲜血进行准确定值。通过定值新鲜血的量值传递[2]，可应用于常规分析仪，新鲜血用于血液分析仪已逐渐适用于临床常规实验室。为防止血液污染全部采用正常健康人静脉抗凝血100人份。年龄18-55岁之间。
       1．1．2 仪器：KX-21血细胞分析仪(日本，SYSMEX公司)，显微镜(日本，OLYMPUS光学工业株式会社)，750分光光度计(上海现科仪器有限公司)，pH计，电导率仪。
       1．1．3 试剂：KX-21配套的进口试剂一套，季胺盐(AR，石家庄瑞丰大地化工有限公司)，氰化钾(AR)，Tritonx-100助溶剂(广州丰天化工有限公司)，稳定剂(叠氮钠)。
1．2 方法
       1．2．1 配制方法：根据溶血素所需的化学试剂进行配制，先测进口溶血素的吸光度、pH、光谱吸收等数据。在配制过程中，加入各化学试剂的量的同时分别进行这几项的测定，必须保证所配制溶血素的这几项指标结果与进口溶血素的结果相一致。
       1．2．2 配制溶血素[3]：用天平称取季胺盐(烷基溴化铵5.6 g/L、磷酸二氢钠0.9 g/L、磷酸氢二钠3.9 g/L)、氯化钠5.7 g/L、NaN3 1.5 g/L，加入蒸馏水加热使其溶解后，加入氰化钾100 mg，加入Tritonx-100助溶剂1 mL。最后配成1 L 混合液制备成溶血素。
       1．2．3 结果对照
       1．2．3．1 对比实验：随机采取健康人与病人全血各30人份，在KX-21机器上进行测定，每个标本测定3次，取平均值。先用进口溶血素测定，计算相关系数，再用自制的溶血素进行测定，将两次所得结果进行对照。
       1．2．3．2 理化指标对比：将自制溶血素从光谱吸收、pH值、吸光度三个方面进行测定与进口溶血素进行比较。
       1．2．3．3 血红蛋白结果比较：选用卫生部临床检验中心血液质控品(高中低3个水平)，定值结果可溯源至血细胞分析仪参考方法[4]，进行自制溶血素与进口溶血素的比较。
       1．2．3．4 显微镜下的结果比较：取10个正常血液标本，分别加入进口和自配的溶血素中。进行镜下红白细胞的计数和比较，以上操作由3名经验丰富的临床血液学检验师用同样的试验条件下进行操作。
       1．2．3．5 重复性测定：取10个血液标本分别用进口与自制溶血素进行上机测定，每份标本测定10次，取出10次结果计算 x±s，最后得出变异系数(CV%)。
       1．2．4 自配试剂中血细胞形态观察：由3名有经验的临床血液学检验师进行瑞氏染色后镜检，见嗜碱性粒细胞形态完整，其他白细胞胞膜破坏，仅剩裸核；嗜酸粒细胞形态规则，浆内颗粒清晰可见。
       1．2．5 统计学分析：所有数据采用SPSS 10.0软件包进行分析，P值<0.05为有统计学意义。
2 结果
2．1 均匀性测定
       各项结果参数CV%(批间精密度)<5%，见表1。

2．2 溶血素A750测试
       进口与自研溶血剂A750分别为0.0042、0.0049，均达到ICSH规定的仪器标准，见表2。

2．3 血红蛋白含量比较
       血红蛋白高、中、低值CV%<5%，见表3。

2．4 显微镜计数
       显微镜计数比较显示与仪器大体一致，无统计学意义，P>0.05。
2．5 重复性测定
       同一时期抽取的10支溶血素每瓶之间的差异非常小，CV%<5%，见表4。

3 讨论
       用抗凝新鲜血对血液分析仪进行室内与室间质量控制，国内已有报道[5]，溶血素是影响血红蛋白测定和白细胞阻抗计数(WBC impedance count，WIC)的重要原因之一[6]。血液分析仪要求溶血素在几秒钟内完全溶解红细胞，又要对白细胞具有一定的修饰作用。日前，全自动型血液分析仪不断涌现，血液标本可直接被吸入分析仪后，在机内自动完成稀释、加入溶血素、定时检测，大大提高了仪器的精密度和准确度。本实验通过研究配制溶血素，同时对其渗透压、pH、光谱吸收等相关参数进行监测，不断地调整其在各样品中的浓度，而且在实验中首先保证这几项关键数据与进口溶血素的一致性，进行重复性测定和显微镜下分析结果均显示良好。通过一段时间间隔的测定结果分析，显示自配溶血素的稳定性良好。自研溶血素与进口溶血素的吸收光谱吻合性良好。此外，A750是检测红细胞碎片对血红蛋白测定影响的重要参数，ICSH要求仪器比色法A750应小于0.012。而自研试剂A750为0.0049，与进口原装试剂的0.0042极为接近，达到了ICSH 要求。
       溶血素是血细胞分析仪工作过程中最重要的试剂之一，也是所需几种试剂中价格最为昂贵的。目前医院都在进行成本核算，提倡节约成本，而试剂占了检验费用很大比重，本组成功地研制了溶血素，质量上可以替代进口试剂，而实际成本仅为进口试剂的三分之一左右，这样可以显著地降低试剂的成本，从而减轻了患者负担，能够收到良好的社会效益和经济效益。
[参考文献]
[1] 崔颖鹏．血细胞自动分析仪与溶血素[J]．国外医学临床生化与检验分册，2000，21(1)：29-30．
[2] 陈化禹．新鲜血校准多台血细胞分析仪的可行性研究[J]．检验医学，2005，20(3)；198-200．
[3] 范仲元，血液计数仪溶血剂的配置和应用[J]．上海医学检验杂志，1998，13(2)：114．
[4] 彭明婷．北京市三级医院全血细胞计数结果可比性和准确性调查[J]．中华检验医学杂志，2007，30(9)：987-991．
[5] 岳育红，丛玉隆，王清涛，等．抗凝新鲜血在血液分析仪质量控制及评价中的应用[J]．临床检验杂志，2004，22(6)：466-467．
[6] 张金生，黄天禄，李胜发．AC2920自动血细胞分析仪溶血剂的研制和应用[J]．重庆医科大学学报，2000，25(1)：73-76．
                                                                                                                                编辑：范伟伟