HIV抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较

我心依旧

                                                                                    中国药品生物制品检定所    李秀华 宋爱京 王佑春
       【摘要】目的  比较HIV抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异。方法  用HIV抗体诊断试剂和HIV抗体酶联免疫诊断试剂分别检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品、HIV不同亚型样品以及HIV高危人群样品。结果  检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品中, 20份阳性样品只检出10份阳性,5份最低检出限样品只检出1份阳性。与酶联免疫试剂相比, 对B亚型样品的检测, 其灵敏度低2~8倍;对AE重组样品, 其灵敏度低100倍;对BC重组样品, 其灵敏度低2~10倍。在HIV高危人群样品中, 与酶联免疫诊断试剂阳性符合率为88.2%, 阴性符合率为97.3%。结论  快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂, 因此, 其应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂。
       【关键词】人类免疫缺陷病毒;抗体;诊断试剂;基因型;亚型

       目前, 我国已有10余家企业生产HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 主要采用双抗原夹心法。该类试剂灵敏度高, 已广泛应用于血液的筛查。最近, 已有快速诊断试剂投放市场, 该类试剂主要采用胶体金或胶体硒对抗原进行标记, 采用层析原理检测HIV抗体。本文对HIV抗体酶联免疫诊断试剂与HIV抗体快速诊断试剂进行比较, 现将结果报告如下。
材料与方法
1、样品
       HIV抗体酶联免疫诊断试剂的国家参考品为本室研制, 批号为200107, 其中包括20份阴性参考品、20份阳性参考品、5份最低检出限参考品和1份精密性参考品;B亚型的样品来源于河北, BC重组样品来源于新疆, AE重组样品来源于新疆和重庆, 均由本科室对其进行基因分型并保存于-70℃的冰箱中;300份高危人群的血清样品收集于我国南方某戒毒所的全体患者, 为一整体人群, 该样品保存于-70℃的冰箱中。
2、试剂
       Abbott公司的HIV抗体快速诊断试剂, 即Determinate诊断试剂, 批号9144U102, 效期为20030818;生物梅里埃HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 批号A44AB, 效期为200401;上海科技HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 批号20021232, 效期为200306;北京金豪HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 批号20030328, 效期为200309;北京万泰HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 批号I20030404, 效期为200310;珠海丽珠HIV抗体酶联免疫诊断试剂, 批号20030320, 效期为200409。
3、检测方法
       用Abbott快速诊断试剂检测HIV抗体酶联免疫诊断试剂的国家参考品。将B亚型、BC重组和AE重组血清以10倍稀释, 稀释到104以后再以2倍稀释。用以上各种试剂同时检测HIV亚型的稀释样品和300份HIV高危人群血清, 所有操作均按试剂的说明书进行。
结果
1、对HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品的检测
       用Abbott公司的HIV抗体快速诊断试剂检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品, 结果显示在20份HIV抗体阳性参考品中, 只检出10份为HIV抗体阳性;5份最低检出限样品只检出1份为阳性, 而且精密性样品检测为阴性, 见表1, 说明快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂。

2、对HIV不同亚型血清的检测
       将HIV不同亚型的血清进行稀释, 并用不同的试剂同时检测, 与生物梅里埃HIV抗体酶联免疫诊断试剂相比,Abbott决速诊断试剂检测B亚型血清的灵敏度低2~8倍, 检测AE亚型血清的灵敏度低100倍, 检测BC 亚型血清的灵敏度低2~10倍。同时检测结果还显示, 科华和丽珠试剂检测B亚型血清的灵敏度较高, 丽珠试剂检测BC 重组型血清的灵敏度也较高, 万泰试剂检测AE重组型血清的灵敏度较高, 见表2。

3、对HIV高危人群血清的检测
       用Abbott公司的HIV抗体快速诊断试剂和梅里埃HIV抗体酶联免疫诊断试剂同时检测300份高危人群血清, 结果显示酶联免疫诊断试剂检测76份为阳性, 其中快速诊断试剂检测67份为阳性, 阳性符合率为88.3%,酶联免疫诊断试剂检测224份为阴性, 其中快速诊断试剂检测218份为阴性, 阴性符合率为97.3%;总符合率为95%, 见表3。

讨论
       根据试剂的适用范围, 可将现有HIV抗体诊断试剂分为筛查试剂、确证试剂及其它试剂。筛查试剂主要对献血员进行筛查, 因此要求试剂操作简便,成本低廉, 而且灵敏、特异。由于HIV经血液传播的危险性极大, 因此对试剂灵敏度的要求尤其高。目前我国用于HIV血液筛查的试剂主要是第三代酶联免疫试剂。该类试剂有较高的灵敏度和特异性, 而且操作简单, 适合于大规模筛查。近几年开发了以胶体金或胶体硒为标记物、以硝酸纤维素膜为载体, 以层析形式进行固相免疫测定的技术[1,2], 利用该技术制备的HIV抗体快速诊断试剂, 可以在室温条件下保存1年或更长, 操作简单而快速, 数分钟即可得出结论, 不需仪器设备, 尤其适用于单份血样测定。但该类试剂灵敏度偏低, 不能用于献血员的常规筛查。因此, 国家有关部门对所有该类诊断试剂的使用范围进行了严格的限定。
       依据HIV gp 120V3区核苷酸序列的差异, HIV-1可至少划分为A-J10个亚型, 各亚型之间核苷酸序列的差异在22%~35%。A和D亚型主要发现于中非和西非;B亚型主要在北美、西欧等国家流行;C亚型主要在南非、中非和印度等地流行;我国流行的主要亚型为BC重组、B亚型和AE重组[3~5]。由于各种诊断试剂所用抗原不同, 为了解是否对不同亚型血清检测的灵敏度也不同, 将三种亚型的血清进行了系列稀释, 用5种酶联免疫试剂同时检测, 初步结果显示这5种试剂在检测不同亚型样品时其灵敏度存在细微的差异, 但该快速诊断试剂在检测AE重组血样时, 其灵敏度明显降低。这一现象还需要进一步研究。

参考文献
[1]  俞海燕.免疫层析试验的临床应用进展.临床检验信息, 1998,5:118~120.
[2]  陶义训.免疫测定进展.上海免疫学杂志, 1999,19(2):65~68.
[3]  邵一鸣, 赵金壁, 王斌, 等.云南德宏地区HIV感染者膜蛋白基因序列测定和分析.病毒学报, 1994,10:291~299.
[4]  邵一鸣, 管永军, 赵金壁, 等.云南瑞丽HIV-1毒株的基因变异和分析.病毒学报, 1996,12:9~17.
[5]  张树林.HIV分子流行病学.见:百雪帆, 张树林, 主编.艾滋病的诊断与治疗.北京:人民军医出版社, 2000.75.

                                                                                                                编辑：范伟伟