临床3种血涂片常用染色方法的比较分析

龙虎豹

摘 要：目的 探讨3种血涂片常用染色方法的优缺点。方法 对1555张血涂片的3种常用染色方法的效果进行回顾性比较分析。结果瑞氏染色法染色时间短，对细胞质和中性颗粒染色效果好，最适于一般临床检验；姬姆萨染色法染色过程易控制，
对细胞核和疟原虫染色效果好，着色保存时间久，但染色时间长，价格高，适用于特殊的、需长期保存或用于教学的标本；瑞氏姬姆萨复合染色效果综合了上述2种方法的优点，但染液变性快、易污染。结论 临床3种常用血涂片染色方法各有优缺点，应根据实际情况灵活应用，以更好地为临床提供满意的诊断依据。
      关键词：血涂片； 瑞氏染色法； 姬姆萨氏染色法； 瑞氏—姬姆萨氏复合染色

      血涂片染色的目的在于更好地观察血细胞内部结构，识别其异常变化，及时为临床提供初步的诊断依据。大部分血涂片
染色方法源自罗氏(Romanovsky)染色法。临床实验室常用染色方法有3种：瑞氏染色法、姬姆萨染色法和瑞氏—姬姆萨复合染色法。为探讨上述3种染色方法的优缺点，更好地为临床提供满意的服务，笔者对1555张血涂片的3种染色方法的效果进行了回顾性比较分析，现报道如下。
1 材料与方法
      1．1 一般资料  2005年1月至2009年9月于本院检验科细胞室采集末梢血或静脉血的患者485例，其中血液病36例、贫血214例、疟疾2例，其他243例为发热或不明原因白细胞总数低于(或高于)正常参考范围者；患者年龄3～ 75岁，平均46．5岁。
      1．2 方法  (1)染色液配制：2007年之前，瑞氏染色液、瑞氏—姬姆萨复合染色液的配制均根据《全国临床检验操作规程(第2版)》配制，2007年以后根据《全国临床检验操作规程(第3版)》配制。姬姆萨染色液根据《实用医学寄生虫学》 配制。
(2)血涂片制备：每例患者采集外周血标本后根据采血量和病情需要制备3～6张血涂片(查疟原虫时制备厚血片)，制备血涂片共计1555张。(3)染色：分别用3种方法对每例患者血涂片标本进行染色。染色操作及注意事项参照具有权威性的教材、规程及染色液使用说明书。瑞氏染色液和pH6．8磷酸盐缓冲液按操作规程预先配制，放置1个月后使用；根据白细胞数量和室温染色5～10 min，流水冲洗。将姬姆萨染色液原液与pH7．0磷酸盐缓冲液按体积比1：15混合配制工作液；滴染法染色经固定的血涂片，根据白细胞数量和室温情况染色30~50 min，流水冲洗。瑞氏—姬姆萨复合染色法参照瑞氏染色法。(4)显微镜观察：显微镜下观察流水冲洗干净的血涂片，包括白细胞分类，胞浆、胞核、颗粒染色情况，详细记录观察结果、染色日期、白细胞总数等资料。每隔1年，连续5年重新观察每例患者血涂片3种染色液的染色情况。
2 结 果
      2．1 3种染色方法近期染色效果比较 瑞氏染色法染色时间短，对细胞质和中性颗粒染色效果好，最适于一般临床检验；姬姆萨染色法染色过程易控制，对细胞核和疟原虫染色效果好，着色保存时间久，但染色时间长，价格高，适用于特殊的、需长期保存或用于教学的标本；瑞氏—姬姆萨复合染色法染色效果综合了上述2种方法的优点，但染液变性快、易污染。
      2．2 3种染色方法远期染色效果比较 3种染色标本染色效果前3年变化不明显。从第4年起，瑞氏和瑞氏—姬姆萨复合染色法染色标本中，细胞开始褪色，尤其是细胞总数较高的血液病和疟疾患者标本，胞核和疟原虫开始模糊，难以辨认；第5年褪色更为明显。但姬姆萨染色标本褪色不明显，基本不影响显微镜观察效果。
3 讨论
      本研究比较了3种方法近期和远期染色效果，发现瑞氏染色法染色时间短，对胞质和中性颗粒染色效果好，最适于一般临床检验，甚至有学者认为可用于液基细胞学检查。姬姆萨染色法最大优势在于染色过程易控制，不易被污染，对胞核和疟原虫染色效果好，染色保存时间久，但染色时间长，价格高，更适于需长期保存的标本。瑞氏—姬姆萨复合染色法染色效果综合了上述2种方法的优点。也有研究认为瑞氏染色后再进行姬姆萨复染，染色效果满意，但染液变性快、易污染。
      临床检验工作以简单快捷为首要要求，建议一般临床检验血涂片标本首选瑞氏染色法，其次为瑞氏—姬姆萨复合染色
法。对于特殊标本，如白细胞总数较高的慢性粒细胞白血病和疟疾患者血涂片标本，建议采用姬姆萨染色法或瑞氏—姬姆萨复合染色法。对于需长期保存或用于教学的标本，应采用姬姆萨染色法。总之，上述3种染色法各有优缺点，需根据实际情况灵活应用，以更好地为临床提供满意的诊断依据。
                                                                                                                                        本文编辑：范伟伟