尿液试带法各项测试注意事项

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       尿液分析是尿液和分析二词的组合，中华检验医学大辞典对尿液分析明确定义：“用目测、理学、化学（应强调定性、定量）、显微镜及其化仪器（各种尿分析仪、渗透压计等），对液标本进行分析”。
       尿液分析是诊断泌尿系统疾病的重要指标之一，通过尿液物理学和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成分的变化，在尿液沉渣镜检中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料，对肾和尿路疾患的诊断和鉴别诊断、疾病严重程度和预后的判断，都有极重要的意义。尿液分析的准确程度直接影响到临床诊断，提高尿液分析检查的质量保证是关系到临床检查的重要环节。质量控制的目的是确保对病人的优质服务，为临床医生提供客观、可靠信息去诊疗病人。随着基础医学的发展，各种先进检测技术，特别是电子技术及计算机的应用，不断提高尿液检查的自动化水平。各种尿液分析仪的开发经验，尿沉渣全自动化分析仪成相继问世，较好地解决了尿沉渣镜检自动化。今天重点讲讲尿液试带法各项测试的注意事项。
一、PH
       原理： 干化学法尿PH检查的原理是采用酸碱指示剂法，其测试膜块区含有甲基红（PH4.6—6.2）和溴麝香草酚蓝（PH6.0—7.6），两种酸碱指示剂适量配合可反映尿PH4.5—9.0的变异范围。
注意事项：
       1  标本必须新鲜，放置过久细菌分解尿液成分可导致PH改变，如大肠杆菌等，分解尿素产生氨，可使尿液呈碱性。（少数情况下，细菌也分解尿液产生酸性物质，使尿液PH偏低）。
       2  当肾脏分泌的尿液含有过多的碳酸氢盐和碳酸缓冲对时，如果尿液放置时间过久，尿液中的二氧化碳会自然扩散到空气中，使尿PH增高。
       3  尿液PH主要反映肾脏在维持血浆和细胞外液正常氢离子浓度方面的能力，而干化学法测定是一个半定量的实验结果。因此在临床观察结果时，不要单从尿PH测定值分析，要结合临床其他资料和实验数据，综合分析才能得出正确的判断。
二、比重：（SG）
       原理： 干化学试剂带法测定尿比重的膜块中主要含有两种成分；一种是电解质共聚体，即甲氧乙烯顺丁烯二酸共聚合体；另一种是酸碱指示剂溴麝香草酚蓝。
注意事项：
       1  尿液必须新鲜，不能含有强碱、强酸等物质（如奎宁、嘧啶等药物）。这些药物的存在都会直接影响试剂带测定尿比重。
       2  尿蛋白质浓度增高时   由于尿白分子本身是两性电解质，即本身既有电荷又有固体量，对方法都有影响。
       3  干化学法不宜用于新生儿尿比重检查，这可能是由于新生儿尿比重太低，仅在1.002—1.004之间的缘故。
       4  由于干化学法所测比重结果间隔较大，不能反映较小的比重变化。只能用于病人尿比重筛选。病理性可用折射仪法测定。
       建议用折射仪法作为参与方法。（当尿液含X光线反差介质、葡萄糖、蛋白时可使结果增高，应予校正。蛋白1g/dL时SG增高0.003）。
三、尿蛋白测定
       干化学法测定原理： 在一定的条件下（PH为3.2时），溴酚蓝产生出阴离子，与带阳离子的蛋白质（主要是白蛋白）结合发生颜色变化。这种现象早在1909年被Soernsen发现，并称为指示剂蛋白质误差法。
注意事项：
(一)   尿液PH   
       尿液标本必须新鲜，变质的尿液会使尿液PH发生变化，或者尿液过酸、过碱都会影响实验结果。
       当病人服用奎宁、奎宁丁和嘧啶等药物时，引起尿液呈强碱尿（PH≥9.0），超过了试剂带本身的缓冲能力，会使干化学法出现假阳性结果；而用磺基水杨法和加热乙酸法作尿蛋白定性时，因尿过碱，远离蛋白质的等电点出现假阴性结果。同样PH<3.0时，也会引起尿蛋白定性试验的假阴性。
(二)   尿液所含蛋白成分
       不同的尿蛋白测定方法对病人尿液内不同类型蛋白质检测的敏感性不同，测定结果也不相同。
       王淑娟教授报道，当尿液中球白浓度为4000mg/L以下时，干化学法蛋白定性为阴性，只有当其浓度达5500mg/L时，才出现可凝反应；白、球蛋白比值为1：2的蛋白尿，蛋白浓度高达2000mg/L时才会出现阳性（+）反应，干化学法测定球蛋白的敏感性为白蛋白的1/100～1/50。磺基水杨酸定性法对球蛋白反应的灵敏度亦较白蛋白低，浓度同时为2000mg/L时，白蛋白出现阳性（++）反应，球蛋白仅为阳性（+）反应。
       在白、球蛋白尿中，球尿白比例增大，则阳性程度减弱。因此在进行肾病患者尿蛋白的测定时，特别是疾病发展过程中需要系统观察蛋白含量的病例，最好进行定量试验。
(三)  尿液中的干扰物
       研究证明，多种物质（多为药物）可使蛋白不同检查方法呈现出假阳性和假阴性结果。丛玉隆等曾探讨了多种抗生素对尿蛋白测定影响的研究，发现青霉素族药物对其有明显的干扰作用。为了证明这一点，笔者对大剂量青霉素静脉注射患者用药前后进行了尿蛋白的检测，
结果表明：
       1  尿液内青霉素浓度超过4万U/mL时，对干化学法测定尿蛋白产生假阴性，而对磺基水杨酸法测定尿蛋白产生假阳性。
       2  静脉滴注青霉素240万U组24小时内，320万U组3小时内，480万U组5小时内，尿中青霉素浓度可以达到影响尿蛋白测定水平。可对磺基水杨酸法产生假阳性，对干化学法产生假阴性。

       因此,对于含蛋白尿的患者使用青霉素治疗时,使用不同的测定尿蛋白方法需要考虑不同的干扰作用,即磺基水杨法使结果增强或出现假阳性,干化学法测试使结果偏低甚至出现假阴性.除此之外,尿中含有高浓度有机碘造影剂(如胆影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸盐时，磺基水杨酸法可呈假阳性，而对干化学法和加热乙酸法影响较小。

(四) 尿液存放的时间及污染
       尿液存放时间过久而致细菌生长繁殖，或尿液受其他分泌物如阴道分泌物污染，或含有较多细胞成分时，也可出现阳性反应。但这种蛋白尿绝非泌尿系统病变所致。

四、尿糖测定

       干化学试剂带法测定尿糖的膜块中主要含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和色源及其他物质。（不同厂家采用色源有异）主要有两类：① 采用碘化钾作色源，②  采用联甲苯胺作色源。
       测定原理：膜块内葡萄糖氧化酶（GOD）作用于尿液中葡萄糖，使其形成葡萄糖和过氧化氢（H2O2），后者再被过氧化氢酶（POD）催化释放出[O]，后者使色源呈现不同的颜色变化。
(一)干扰物对两种方法的影响：
①  维生素C对尿糖测定的影响
       研究证明，尿中存在的维生素C既可与班氏试剂中的铜离子作用，使班氏尿糖定性产生假阳性；又能对尿液在低葡萄糖浓度（14mmol/L）时，与试剂带中的试剂发生竞争抑制反应，使干化学法产生假阴性。
②  抗生素对尿糖测定的影响
       除维生素C外，抗生素也对尿糖测定有影响。（丛玉隆教授使用19种抗生素）发现许多抗生素对班氏法糖定性、糖定量测定结果有不同程度的影响，而对干化学法定性及酶法定量没有影响。这可能与抗生素同班氏试剂中铜离子发生反应，试剂带及酶法不含铜离子，故不受影响。例如，空白对照班氏定性（++）使用氨苄青霉素的浓度达到4000ug/L时，班氏定性（+++）；又如头孢去甲噻肟的浓度达到2100ug/L时，班氏定性（+++）；先锋V浓度2400ug/L时，班氏定性由原来的（++）变为（+）。
③  影响尿糖测定的其他因素
       高浓度酮体尿可引起假阴性，尿比重增高，可降低试剂带对糖的敏感性。大剂量服用左旋多巴时，产生抑制反应（该药进入体内可被代谢生成3.4---二羟基醋酸）使尿糖结果偏低或出现假阴性。
       干化学法测定尿葡萄糖只是一般半定量的过筛实验，它所设计的档次与传统班氏定性法的档次存在差异，因此对于动态观察的糖尿病病人，最好使用湿化学定时分析。

五、尿胆红素、尿胆原检查：
注意事项
       1  标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为胆绿素，尿胆原氧化成尿胆素。
       2  尿中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应，使胆红素呈假阴性；当患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物，可呈阴性反应。
       3  尿液中一些内原性物质如胆色素原、吲哚、胆红素，可使尿胆原检查结果出现假阳性，一些药物（如吩噻嗪）也可产生颜色，干扰实验。
       4  正常人尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，午后则迅速增加，在午后2-4小时达最高峰。收集午后2-4小时进行测定，可以提高检出率。
       5  对于阻塞性黄疸尿胆原减少的病人，不能使用干化学法进行测定，因为（大多数）有些尿液试剂带都没有设置检测尿胆原阴性这一项。

六、亚硝酸盐
       尿亚硝酸盐是用于尿路细菌感染的快速筛检试验。尿亚硝酸盐试验是细菌感染的指标，其阳性结果的产生取决于3个条件。① 尿液中的致病菌须含有硝酸盐还原酶 ② 体内有适量硝酸盐的存在 ③ 尿液在膀胱内有足够的停留时间（＞4h）且排除药物等干扰因素。
       干化学法亚硝酸盐诊断大肠希菌感染的阳性符合率为80%，但考虑到标本放置时间过久，尿液被亚硝酸盐或偶氮剂污染可呈假阳性结果因素，因此对于阳性结果的解释仍须慎重。同时，如果试验阳性的3个条件不能满足，加之诸多因素可导致假阴性，因此，检测结果阴性并不能排除菌尿的可能（原因是因为有些细菌，如结核菌、链球菌、淋病双球菌等其他革兰阴性菌，对硝酸盐的还原性呈阴性反应），尿液中原胆原、VivC、尿PH大于6、尿量过多，都可能造成亚硝酸盐假阴性结果。

七、尿白细胞、红细胞测定
干化学法测定的原理
       尿液中的血红蛋白或其破坏释放的游离血红蛋白与均含有亚铁血红素，后者是有过氧化氢酶样活性，可使过氧化物分解释放出新生态氧[O],[O]能使无色的邻甲联苯胺（或四甲替联苯胺）变成蓝色的邻甲联苯胺（或四甲替联苯胺）物质。
       尿白细胞试剂带测定膜块的主要成分是吲哚酚酯、重氮盐两种。测定原理：基于粒细胞胞浆内含有酯酶，此酶可作用于膜块中的吲哚酯酚，使其产生吲哚酚，后者与重氮盐反应形成紫色缩合物，基颜色深浅与细胞的多少呈比例关系。
1  试剂带的批间差异
       不同厂家，不同型号的试剂带，测定尿红、白细胞的敏感不同，使用时必须注意批间差异。（以免因试剂不同而引起同一份标本测定结果的差异）。
2  标本对结果的影响
       尿液标本必须新鲜，留尿后尽量立即测定，以免红、白细胞破坏，导致干化学法与镜检法的人为实验误差。
干化学法既可测定完整的细胞成分，又能测定因细胞破坏胞浆内涵物来辨别细胞的有无（通过特异或非特异性酯酶检测白细胞，通过血红蛋白过氧化物样反应检测红细胞）因此报告时要了解临床诊断，综合分析，排除相互结果的干扰。
       某些肾病患者的终尿，由于各种原因使细胞裂解，可导致仪器法与目测法的差异，有学者认为，此类标本最好不使用干化学法测定。
3  干扰物对红、白细胞测定的影响
（1）对白细胞试验的干扰
       干化学检查尿内白细胞的原理，是基于粒细胞浆内含有酯酶，可作用于试剂带膜块中的吲哚酚酯。
       1）   应了解干化学法只能测定粒细胞，不与淋巴细胞反应，在肾移植病人发生排异反应尿中以淋巴细胞为主时，会出现阴性结果。（此类病人不应用于化学法检验，应该以显微镜检查法为准）。
       2）  尿液中污染甲醛、或高浓度胆红素，或使用某些药物（如呋喃呾啶）时，可产生假阳性；尿蛋白＞5g/L，或尿液中含有大剂量先峰V、庆大霉素等药物时，可使结果偏低或出现假阴性。
（2） 对红细胞试验的干扰
       尿液中有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿，可引起干化学法测定尿红细胞的假阳性；易使检测红细胞出现假阳性的原因主要是热不稳定过氧化物酶的干扰。有学者对690例尿液进行了分析，其中113例干化学法阳性，镜检阴性，进一步用金标法抗Hb单克隆抗体检查也为阴性；但将尿液加热煮沸后再进行干化学检查，结果为阴性，说明假阳性是由于存在不耐热的氧化物酶所致。尿液中大量维生素C的存在，可竞争性抑制反应致使干化学法产生假阴性反应，应予以警惕。有学者通过实验发现，静脉滳注维生素C 5小时后才能达到不影响尿红细胞测定的水平，因此静脉滴注后，原则上在5小时内不要留标本进行检测。
1 细胞破坏造成的“假阴性”现象
       所述“假阳性”“假阴性”现象，是以显微镜检查为基础的。
       由于干化学法是检测细胞胞浆内涵物来辨别细胞的有无（通过特异或非特异酯酶来测白细胞，通过血红蛋白过氧化物酶样反应检测红细胞）在实际工作中可能存在下列问题。
       （1）  白细胞：由于尿液在膀胱贮存时间过长或标本放置时间延长，导致白细胞破坏，中性粒细胞酯酶释放到尿液中，造成干化学法阳性、镜检阴性的所谓“假阳性”现象。分析仪法阴性，镜检法阳性。这种情形多发生在肾移植患者发生排异反应时，尿中的淋巴细胞为主，另外，尿液中以单核细胞为主时也会出现此结果。因此干化学法检测的是尿中完整的及溶解的中性粒细胞，而与淋巴细胞及单核细胞不起反应，此时，应以显微镜检查为准。
       （2）  红细胞：分析仪法阳性，镜检法阴性：这种情形可由于尿液中红细胞常被破坏而释放出血红蛋白，多发生于肾病患者，或某些患者尿液中含有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿，引起红细胞干化学测定结果的假阳性；将尿液煮沸冷却后再测试可以排除对热不稳定酶的影响。
       分析仪法阴性，镜检法阳性：这种情形一般很少，但可发生在尿液含大量VitC（＞100mg/L）或试带失效时；若使用尿十一联试带，可通过观察VitC的含量来加以判别。
       因此在干化学法结果与显微镜下所见出现矛盾时，要结合临床综合分析，甚至要动态观察，切不可一概否定干化学法结果。
干化学过筛适用范围的局限性
       1   肾科及泌尿系科病人的尿液不适合于干化学过筛显微镜检查。
       2   以镜检结果作为诊断依据（如结石、结晶和肿瘤细胞）或观察疗效时，不宜使用干化学法作为过筛。
       3   由于干化学分析干扰因素较多且不可避免的有一定的假阴性率，因此要结合临床表现判断结果，决不可只看干化学分析，忽视镜检。

                                                                                                        编辑：范伟伟