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[质量控制] 当我看见组长用错了染液…

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发表于 2017-7-30 10:10:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
作者:河南省安阳市人民医院检验科  位冒冒

有一次,与组长共同值班。有一个男性尿道分泌物做超高倍显微镜检查,该分泌物呈黄色脓性,根据以往的工作经验,高度怀疑其为“双球菌”感染;于是,在做盐水湿涂片前,需要先直接涂片进行染色镜检;这时,我却看见组长竟然用瑞-姬氏染液开始染色了。

我清楚的记得,几年前接触该方面工作时,其他同事分明都是使用革兰染液染分泌物标本的;而且,一般情况下,观察微生物形态、染色与初分类时也大都使用革兰染色法。于是,我委婉的提醒道,“怎么用瑞-姬氏染液染色呢?不是应该用革兰染色染双球菌的吗?”组长说,“我以前看过一些文献,用瑞-姬氏染液染分泌物,结果会很好看(容易观察)。”“那用瑞-姬氏染色怎么判断双球菌是革兰阴性还是阳性呢?”组长接着说,“咱们报的那项内容只是‘有无双球菌’,并不要求判断革兰阴性或阳性,再根据染色后镜检结果提示病人是否需要做淋球菌培养。”

虽然,我慢慢的接受了组长的观点,但实践才是检验真理的唯一标准,得看一下使用瑞-姬氏染液染色的实际效果才行;直到我们遇到了一份含有革兰阴性双球菌(同标本革兰染色验证)的男性分泌物标本,使用该染色后实际效果如下图,双球菌被染成深紫蓝色/深蓝色,与白细胞的颜色对比鲜明,也有利于观察其形态结构。

1.1

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一、瑞-姬氏染色的优势

然后,根据组长所述的文献,我们也查到了一些相关文献报道,查知瑞-姬氏染色也有其优势:

相对于革兰染色来讲,瑞-姬氏染色更加简便、快速。在男性尿道口分泌物中,革兰阴性双球菌的出现常伴随着大量的白细胞,而在白细胞胞浆中观察到双球菌的临床意义更大;瑞氏染液对胞浆着色效果好,姬姆萨染液对胞核着色效果好,可将革兰阴性双球菌被染成深紫色,使白细胞与双球菌的着色颜色对比鲜明,更有利于油镜下的观察和辨别。

革兰染色也有其不足:首先,染色前的涂片热固定,可能会因高温造成细胞破裂,双球菌从细胞中逸出,被误判为“细胞外”而降低其临床诊断意义;其次,当涂片过厚时,容易将革兰阴性双球菌染成革兰阳性,当使用乙醇进行脱色时,脱色过度或不彻底都会对识别造成干扰;另外,如患者病情时间长或女性阴道分泌物,由于标本中的杂菌比较多,革兰染色特异性和敏感性都会比较差。

二、超高倍显微镜与染色的真正意义

超高倍显微镜在分泌物直接涂片的检查中,配合成像系统可以达到超高的放大倍数,可以清晰的把握分泌物中的滴虫、白细胞、真菌菌丝及孢子、线索细胞等项目,并可初步诊断支原体、衣原体、双球菌等病原微生物的感染,检验快速、简便,且为进一步的确定性诊断提供依据。双球菌作为其中一个项目,因其常处于白细胞胞浆的特点,在成像系统中直接观察辨别尚有一些难度,一般都是再结合涂片染色综合判断。

超高倍显微镜加染色可以确诊淋病奈瑟菌吗?当然不能,确诊淋病奈瑟菌仍需要细菌分离培养及鉴定、PCR等检验手段。那么,超高倍显微镜加染色对于检测分泌物中双球菌的意义,重在筛查与初步诊断,提出进一步细菌培养及鉴定的建议。

三、革兰染色的地位

革兰染色作为细菌染色最常用、最经典的染色方法,对于绝大多数标本分离培养之前进行革兰染色,可以初步将细菌分类,缩小识别范围,有助于进一步的细菌鉴定。

检验工作中常见的双球菌感染包括肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和卡他莫拉菌等;其中,仅肺炎链球菌为革兰阳性,即革兰染色对于初步区分双球菌种类方面的作用较小。在油镜下观察分泌物染色标本时,尚需根据细菌形态进行鉴别,淋病奈瑟菌镜下特有的双肾样、咖啡豆样凹面相对形态,即可与其他常见双球菌进行区别;因此,单纯对于双球菌的初步鉴别,个人认为,革兰染色与瑞-姬氏染色的差别不大。

四、初步筛查与灵敏度

许多的检验项目或检验方法与手段都是以初步筛查为目的的,对于疾病的诊断起辅助作用,检验科将患者初步筛查的数据反馈给临床,临床医生再根据患者的具体病情做进一步的检查申请。

灵敏度与特异性就像鱼和熊掌不可兼得一样,不同的检验方法都有其对灵敏度和特异性的特殊要求,初步筛查的实验一般重在高灵敏度,确诊实验重在高特异性。在不可兼得的情况下,筛查实验对于简便、快速、价优等方面的要求才得以实现。

最后,请问大家,你们实验室用什么染色方法筛查双球菌呢?您认为分泌物染色观察双球菌时,革兰染色与瑞-姬氏染色有没有较大区别呢?欢迎留言!

参考文献:
[1] 李采青,刘金禄,李玉芬,韩旭颖.超高倍显微成像系统检查男性尿道分泌物的临床分析[J].河北医科大学学报,2010,31(4).
[2] 赵春明,崔玉凤,赵岩峰.超高倍显微镜在生殖道病原微生物检测中的应用[J].检验医学与临床,2007,4(2):114-115.
[3] 徐雷,明忠光.瑞氏-姬姆萨复合染色法在分泌物涂片中的应用价值[J].中国基层医药,2003,10(5):480-480.
[4] 刘念,周云飞,陆昊,杨海刚.阴道分泌物3种染色方法比较[J].检验医学与临床,2010,7(13):1379-1380.
[5] 张霞,张俊,吕宜华.妊娠合并生殖道感染病原体检测与治疗[J].实用医技杂志,2005,12(3).


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<div class="keytags">关键词:双球菌瑞-姬氏染液革兰染色
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