酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用

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作者：成军 孙关忠 郑怀… 文章来源：中华医学检验杂志 1998年第1期第21卷 点击数： 813 更新时间：2005-7-17

近年来，酶标仪在临床实验室中的应用越来越普及［１］，而国内外有关其性能评价与鉴定方法的报道尚不多见；为了保证酶标仪检测结果的准确性和可靠性，我们对不同厂家及型号的仪器经过系统论证，初步建立了一套酶标仪性能评价指标与鉴定的方，同时应用该法对美国Bio-Rad 550型酶标仪进行了评价，结果满意，现将评价方法和应用结果报告如下：    　　一、材料和方法    　　(一)主要仪器与材料：    　　1.日本岛津UV-2201型分光光度计及AEL-40SM型电子天平；美国Bio-Rad550型酶标仪。    　　2.不同波长的滤光片（美国Bio-Rad公司馈赠）；Ｕ型酶标微孔板条（上海科华公司）；微量加样器（上海求精公司，200 μl±2％CV）；甲基橙（Sigma公司）及溶血液（生理盐水洗涤红细胞后，用蒸馏水配制成总胆红素为45、35、25μmol/L的三种不同浓度）。    　　(二)酶标仪评价指标和基本方法：    　　1.滤光片波长精度检查：用紫外可见分光光度计（波长精度±0.3 nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫描，其检测值与标定值之差即为滤光片波长精度。    　　2.通道差与孔间差检测：(1)通道差：取一只酶标微孔杯以酶标板架作载体，将其［内含200 μl甲基橙溶液，吸光度(A)0.5左右］先后置于八个通道的相应位置，蒸馏水调零，于490 nm处进行测定，各通道之间的差异用极差值来表示。(2)孔间差：选择同一批号酶标微孔板条(8条共96孔)分别加入200 μl甲基橙溶液（吸光度0.065～0.070）先后置于同一通道，蒸馏水调零，于490 nm处检测，其误差大小用±1.96s衡量。    　　3.零点飘移八只微孔杯置于八个通道的相应位置，均加入200μl蒸馏水并调零，于49    　　0 nm每30分钟测定一次，连续观察4小时；其与零点的差值即为零点飘移。    　　4.精密度评价［２］：每个通道三只微孔杯，分别加入200μl高、中、低三种浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，于490 nm作双份平行测定，每日两次，连续测定20天。分别计算批内、日内批间、日间精密度和总精密度的CV(%)值。    　　5.线性测定：准确配制5个系列浓度的甲基橙溶液，于490 nm蒸馏水调零平行检测。计算回归方程、相关系数(r)及标准估计误差Sy.x。    　　6.双波长评价：取一份甲基橙溶液，分别加入三种不同浓度的溶血液，先后于八个通道检测（测定波长490 nm，校正波长585 nm），每个通道测三次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。    　　二、结果    　　1.滤光片波长精度检测结果：见表1。    　　2.通道差与孔间差的检测结果：通道差与孔间差A值分别为0.013和±0.0042。    　　3.零点飘移：仪器八个通道的零点飘移A值均在±0.002范围内波动。    　　4.精密度评价：见表2。    　　5.线性测定：550型酶标仪于490 nm处检测甲基橙系列溶液，线性回归结果为：r=0.    　　999 9，回归方程Y=0.027+    　　表1 滤光片波长精度检查        滤光片波长(nm)         标定值         405.0         450.0         490.0         540.0         550.0         585.0         620.0         655.0         实测值         404.8         448.2         489.1         540.3         549.6         585.1         619.5         654.7         精度差         -0.2         -1.8         -0.9         +0.3         -0.4         +0.1         -0.5         -0.3        　　表2三种浓度甲基橙溶液490 nm处精密度［CV(%)］评价结果        浓度         均值         批内         日内批间         日间         总         高         0.223         1.016         1.186         1.114         1.571         中         0.502         1.004         0.970         0.884         1.324         低         1.249         0.682         0.865         1.153         1.391        　　1.594X，标准估计误差Sy.x＝0.0133。    　　6.双波长测定评价：经统计学处理，结果表明仪器的双波长功能可以有效地消除溶血对测定结果的影响（P＞0.05）。    　　上述结果表明：酶标仪性能评价方法客观、科学，各项指标评价结果符合仪器的设计性能，结果满意。    　　三、讨论    　　1.在对酶标仪进行评估时，还应对仪器的自动化程度及售后服务进行全面了解。自动化程度如仪器的分辨率、报告的方式、可提供滤光片的最大数目、是否拥有用户自编程序及外接微机的功能和软件等；而售后服务则是仪器使用顺利与否的根本保证，用户应当与信誉较好、服务周到、维修方便的代理商进行洽谈，以免仪器一旦出现故障而不致于影响工作。    　　2.本研究建立的酶标仪性能评价与鉴定的方法是以490 nm用甲基橙为例的，对于其他波长和干扰组分也可采用相应物质的溶液进行评价和论证，其方法相同（如655 nm用亚甲基蓝；620 nm用伊文蓝等），这里就不一一赘述。    参考文献    　　1 eisenwiener HG, Keller M. Absorbance measurement in cuvettes lying  longitudinal to the light    　　beam. Clin Chem, 1979,25：117-121.    　　2 余立江,吴锦华,杨树德.NCCLS文件EP5-T推荐的评价仪器精密度性能方法的应用.中华医学检验杂志,1992,15:172-174.