检出一例O139霍乱弧菌

废品

作者:济宁市第一人民医院西院区微生物实验室  孙中兴

2013年5月，笔者从临床粪便标本中检出一例O139霍乱弧菌。现介绍如下，以飨同行。

一、患者信息  患者女性，63岁，农民。因发烧，白细胞升高大于2万，伴有频繁腹泻，从其他医院以血液病待排转来我院就珍。临床所见：患者脱水貌，神志尚可，体温39.6度，每天腹泻达数次，后增至十多次，所泻早期为稀糊状，很快转为浑水样、米泔样。

二、鉴别鉴定  5月15日19时22分接到粪便标本，发现为米泔样（无颗粒、絮状等肉眼可见固体物），笔者疑为霍乱样腹泻标本，故立即于安全柜（BSC1300-2-A2）中做如下处理。

1、标本直接涂片观察动力（压滴法）  高倍镜下发现全部为流星样直线运动细菌。

2、继之，行标本直接涂片制动试验  将可疑粪便标本一滴与O1群、O139群霍乱弧菌鞭毛抗血清分别实验（试剂为兰州生物制品，效期内），并以生理盐水以及铜绿假单胞菌（ACTT27853，省级室间质控自带标准株）作试剂以及细菌阴性对照。混匀后立即镜检（玻片另一端为新鲜标本，以便于对照观察）。结果显示：生理盐水、铜绿假单胞菌、O1群霍乱弧菌鞭毛抗血清皆为阴性（即菌体运动不受影响），而O139群霍乱弧菌鞭毛抗血清与标本混合后，菌体运动迅速减弱、减慢，片刻后即停止不动。是为阳性反应。

3、革兰染色  将自然干燥后的新鲜标本涂片通过酒精灯火焰三次以固定，做快速革兰染色（每步皆10秒。试剂为贝索公司制品，效期内），同时以ACTT25922金黄色葡萄球菌为革兰阳性对照，ACTT25923大肠埃希菌为革兰阴性对照（ACTT25922、ACTT25923皆为室间质控自带标准株）。自然干燥后油镜下所见为革兰阴性菌体，着红色，非常明显弧状形态，典型鱼群样排列，几乎没有杂菌（正常菌群几乎被排尽或受其抑制？）。

此时，第一时间（30分钟之内）电话通知临床医师：可疑霍乱！做好自我防护、控制环境污染、及时进行消毒，建议立即隔离患者。并明确表示让值班医师立即上报院级领导！

4、同时，标本接种血平板、碱性平板、碱性胨水（浙江杭州生物，效期内），35°C培养。

5、连续观察培养物，至次日1点左右，培养已出现肉眼可见结果：

a.碱性胨水管  呈轻度浑浊生长（因时间短，菌量尚少），液体表面隐约已长出一层薄薄的菌膜。

b.碱性平板  已长出肉眼可见小菌落，透明、色微暗绿（原划线菌苔处明显）

c.血平板  也长出了针头大小肉眼看见菌落，透明、色微暗、湿润光滑、有轻微B溶血（菌苔密集处较明显）。

d.分别取胨水及平板培养物重复动力、制动、革兰染色等试验。结果与原始标本相同，只不过革兰染色的菌体形态大多数已为杆状或球杆状，弧状特点已不如直接标本涂片明显、典型。同时用O1群、O139群霍乱弧菌诊断抗血清做玻片凝集试验（生理盐水及ACTT27853铜绿假单胞菌做阴性对照），结果显示：O139群凝集阳性。至此，高度怀疑为O139霍乱弧菌！继续报告临床值班医师以确认。

6、生化反应  取6小时以上培养物做相关试验。结果如下：

氧化酶+  OF-F  赖氨酸+  鸟氨酸+  精氨酸双水解酶-  阿拉伯糖+  蔗糖+  葡萄糖发酵+产气-  乳糖-  甘露醇+  靛基质+  硝酸盐还原+  尿素酶-  枸橼酸盐+  ONPG+  VP+  半固体动力穿刺+  霍乱红+  

嗜盐性试验：0%NaCl 生长+  1%NaCl 生长+  3%NaCl 生长+  6%NaCl 生长+  8%NaCl 生长-  10%NaCl 生长-  

药敏诊断试验： O/129(150微克/片)、多粘菌素（50微克/片）、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑 皆耐药（R）。

7、药敏试验  复方新诺明耐药。氨曲南、左氧氟沙星、头孢他啶、哌拉西林、庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦皆敏感。

8、与其他科、属相鉴别

a.肠杆菌科：本菌氧化酶阳性，肠杆菌阴性（类志贺邻单胞菌除外）。

b.非发酵菌：本菌发酵利用葡萄糖，非发酵菌不利用或氧化利用葡萄糖。

c.气单胞菌科：本菌精双水/甘露醇/嗜盐性为 -.+.+  气单胞菌则为 +.+.- 。

d.邻单胞菌属：本菌 精双水/甘露醇/嗜盐性为 -.+.+.  邻单胞菌属则为 +.-.-  。

（此菌经区、市、省三级疾控中心鉴别确定为O139霍乱弧菌）

三、讨论

1、霍乱是我国以及世界卫生组织管控的甲类烈性传染病，济宁市区为该病老疫区，散发病例可能存在，但O139霍乱弧菌近十年来还是首次检出。对于此类传染病，重点在于早发现、管控传播、及时救治。由于我院此次发现早（接标本后30分钟内就上报了可疑疫情）、诊断早、隔离早、治疗及时、处置得当，启动突发事件应急预案果断有力，从而避免了一次可能出现的霍乱暴发或流行的院内感染事件，也同时避免了一次可能导致社会不良影响、甚至引发恐慌的医疗突发事件。

2、霍乱夏秋季多发，其他季节散发。近年来随着我国城镇化改造，流动人口迅速增加，农村人口向城镇、城市流动，城镇人口向大中城市流动；同时，我国国情更加开放，外籍人员流入逐年增多，霍乱疫情有增长态势；霍乱病原菌也由单一的O1群向O139群、O1群/O139群并存的趋势发展，甚至新型病原的出现也有可能。一线检验工作人员准确及时地作出早期诊断，为临床第一时间提供正确处理的依据，就显得尤为重要。因此，检验工作者熟悉霍乱临床表现、疾病过程，熟练掌握霍乱病原菌早期诊断技术，特别是要有自觉地工作责任心，则是临床处置、决断该类疾病的有力技术支持。

本报道意在抛砖引玉、技术交流，在霍乱的早期诊断、及时发现等方面有所突破。

参考文献：

1、实用临床微生物检验与图谱   主编：陈东科、孙长贵。2011年1月第1版

2、全国临床检验操作规程（第3版）2006年11月第3版第1次印刷

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