常用自动生化分析方法种类及临床应用和校准

狐仙

一、分析方法的种类
  

  1. 一点法   又称为终点法。指加入标本和试剂后，当反应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。主要用于总蛋白，白蛋白，血糖，甘油三酯和胆固醇等项目测定。
  

  2. 二点法   在反应过程中测定两个时间点的吸光度（A1、A2），利用二者差值（A1—A2）计算待测物质浓度的方法。二点法又称为二点终点法，使用双试剂进行分析时多彩二点法，加入标本和第一试剂测定一次吸光度，加入第二试剂（启动试剂）待反应完成时测定另一次吸光度，两者的差值可消除标本内源性物质的干扰。主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目的测定。
  

  3. 二点速率法 在反应过程中选择适当两点测定其吸光度，计算出单位时间（常为分钟）内吸光度的变化量，通过吸光度的变化量计算待测物质浓度的方法。二点速率分析法主要用于Jaffe法测定肌酐。
  

  4. 速率A法  根据酶促反应的特点，当底物浓度足够大，当酶促反应达到最大时，单位时间内底物的消耗量和产物的生成量维持不变，即单位时间内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点，计算出每分钟吸光度变化，吸光度变化值同酶活性大小成正比。速率A法常应用于酶活性的测定。
  

  5. 其它    不常用的分析方法有三波长法和速率B法，主要用于在一个反应杯中进行两个物质测定。
  

  以上各种分析可同时选用双波长法。双波长法指在测定时选择主波长和副波长，主波长用于待测物质的测定，而副波长用于消除可能产生的干扰。副波长选择原则为干扰物质在主波长和副波长的光吸收相等，而等测物质有最小的吸光度，两波长不能相隔太近，一般副波长大开主波长。
  

  二、自动生化分析仪的校准方法
  

  1. K因素法   又称为标准化法或线性法，当物质的浓度和吸光度成比例变化时选用该法。原理是用校准品进行反应，测定吸光度的大小或变化量，根据朗伯—比尔定理（浓度=因素*吸光度）计算出因素（K）的大小，测定待测物质吸光度，利用因素K可计算出待测物质浓度大小和活性大小。K因素法是应用最广泛的校准方法，用于常规生化检验项目的浓度或活性的分析。
  

  2. 非线性法    又称为曲线拟合法，当物质的浓度和吸光度不成比例变化时选用该法。其原理是使用多个（3—6）浓度的校准品，在选定波长测定其吸光度值，利用浓度和吸光度之间的关系绘制非线性标准曲线。生化分析仪多采用Logit-log等方法进行拟合计算出曲线各常数。非线性法适用于免疫分析方法，如C-反应蛋白、类风湿因子、抗“O”和酸性糖蛋白等的测定。