特定蛋白检测的质量控制

钮留

由于特定蛋白检测项目逐渐增多，对其技术程序的标准化，诊断试剂的标准化和常规实验的质量控制已是日益重视。由于特定蛋白形式多样、结构复杂、功能不一，以及免疫检测方法中可能出现的由钩状效应造成假阴性等问题，给特定蛋白检测提出了特别要求。通过专业的特定蛋白分析系统的使用，强化了质量控制，提高了检测质量，大幅度的防止漏检、误诊的发生。
       

        在应用免疫比浊法检测特定蛋白的质量控制中，要考虑主要因素包括：
       

        1.免疫反应因素：抗原、抗体、反应介质
        2.特定蛋白分析系统的系统性：仪器、试剂、检测程序、校准品及质控品
        3. 钩状效应导致假阴性的识别
       

        据有关质量监督部门调查的结果来看，很多实验室测定结果的差异较大，其中一个重要的原因是没有采用一致的参考品进行校准。第1代参考品(即1967年推出的批号为67／86的WHO免疫球蛋白标准品)能很好地用于免疫扩散和火箭电泳测定的标准化，但由于其有些浑浊，就不太适用于免疫比浊法。因此，IFCC委托一个研究小组建立了用来制备新一代国际人血清蛋白参考品(RPPHS)的方法，即在严格控制的条件下收集血清，在冻干之前用硅吸附去除脂蛋白。有许多实验室参加了对白蛋白、a1-酸性糖蛋白、a1-抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白、触珠蛋白、a2-巨球蛋白、转铁蛋白、C3、C4、IgG、IgA、IgM和CRP的测定，与较早的参考品值比较，新参考品改变了某些蛋白的浓度，如a1-酸性糖蛋白、a1-抗胰蛋白酶和IgM。研制RPPHS的目的是用其来校准用于血清蛋白常规测定的第三级参考品，RPPHS可从美国CAP获得。
       

        当前比较流行的特定蛋白的国际标准是CRM-470，其目标是使一个样品在全世界得到一个相同的结果。为此要建立新的国际第二级具血清介质的参考品，用作14种血浆蛋白检测的参考，以后将有更多蛋白被定值。1989年国际临床化学学会(IFCC)会同美国病理学会(CAP)，在与各重要厂商(Abbott、Beckman、Behring等)协商后，指定由Behring公司负责制备国际参考品。按照IFCC定值方案，统一使用指定的各特定蛋白纯化标准为原始标准，避免各实验室因使用的标准不一致造成定值差异，方案详细规定了定值的操作程序以及统计方法。例如，为确保在检测时各标准，样品间无基体效应的差异和没有抗原过剩，要求回归线通过零点，标准和测定都须做多个稀释（须以重量法校正），每个稀释样品做双份检测等。这使27个定值实验室（欧洲、美国和日本）步调一致，在规定期限内完成定值。允许的测定方法为：免疫透射比浊、免疫散射比浊和放射免疫扩散。在1992年欧洲经济共同体的共同体参考局(BCR)认可该参考品，并给予代号CRM-470（认可参考品470）。
       

        使用CRM-470标准后，各重要厂商(Abbott、Beckman、Behring等)都已签署认可CRM-470作为他们公司的第一标准，这带来了一系列的良好效果，如实验室结果的可比性得以改善；依赖方法偏差很低；任何时候任何人可以用；血清蛋白的化学物理特性很好；成年人的参考范围的一致性；液体和尿液的分析也可以得到改善。近年来，其它非签署公司要对自己的校准品定值时，已经形成采用上述公司的特定蛋白检测系列，按照数值传递实验方案，对本公司校准品定值。然后再以患者样品和认可的上述公司检测系列作方法学比较，确认传递的可靠性，再将产品系列推向市场。
       

        值得注意的是，由于免疫方法检测的特殊性，抗原过量的监测是检测结果的质量控制的另一个重要保证。为了保证检测结果的准确性，检测系统应在检测中保证抗体恒定过量，即反应结束后，反应介质中有游离抗体存在，而无游离抗原存在。保证抗体恒定过量，最好的方法是在反应过程完成时，再加入已知相应抗原到该反应介质中，如新加入抗原可与游离抗体结合反应，则产生新的速率峰值，由此证明之前检测到的速率峰信号是由待测抗原完全反应产生的；若新加入抗原后不出现新的速率峰，则说明反应介质中无游离抗体存在，即可能出现待测抗原尚未完全反应，那么之前的速率峰信号可能不是在抗体恒定过量的条件产生，可能受到钩状效应的影响，结果不可靠，需将待测样品进一步稀释后重测。该设计是真正的抗原过量监测，能完全保证检测结果的真实准确可靠，以美国Beckman公司特定蛋白分析的专利设计为例，示意图如下：
       

       

       

        特定蛋白可为临床提供有效的病理生理指标，作为临床诊断、判断治疗效果以及分析预后的依据。选择最优的方法学和专业的检测系统，是保证检测结果准确的首要前提。目前随着国内外对特定蛋白检测标准化的重视，特别是更加有效的参考品的出现，有力地促进了特定蛋白检测的质量水平的提高。
       

        对广大临床和检验工作者来说，在做好特定蛋白检测的质量控制，保证结果准确性的同时，还应对这些特定蛋白的临床应用价值，与疾病发生发展之间的关系，以及可能影响正确检测的因素，有较全面的了解，才能更好的利用这些指标，为疾病诊断和协助治疗提供更好的服务。