CLSI推荐的需氧菌耐药表型

扬雷

        作者：中国人民解放军总医院 微生物科——罗燕萍

       

        如果实验室不能通过确认该微生物而预测其药物敏感性，抗生素敏感性则是对引起感染的微生物进行抗生素化疗的有效指征。敏感性试验常可用来判断该病原体属于某一种对几种常用抗生素具有耐药性的细菌。

        实验室可以用多种方法来衡量体外细菌对抗菌药物的敏感性。在许多临床微生物实验室，琼脂纸片扩散法常规用来检测常见、生长迅速和一些苛氧的细菌病原体。临床和实验室标准协会（CLSI）文件M02-A11——抗菌药物敏感试验纸片法执行标准，包括了一系列规范纸片扩散法的程序。现有CLSI推荐需氧菌耐药表型总结如下：

        CLSI推荐的需氧菌耐药表型

        革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌属、肺炎链球菌属三大类。葡萄球菌属包括青霉素耐药和ß-内酰胺酶、甲氧西林/苯唑西林耐药、万古霉素的耐药性，诱导性克林霉素的耐药；肠球菌属为青霉素/氨苄西林耐药、万古霉素抗药、高水平氨基糖苷耐药；肺炎链球菌有青霉素和第三代头孢菌素耐药。
革兰阴性菌耐药表型包含超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、碳青霉烯酶。
        CLSI推荐预测基因型药敏试验方法

       

        革兰阳性菌耐药表型检测方法

革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌属、肺炎链球菌属三大类。

       

        1. 葡萄球菌属
检测包括青霉素耐药和ß-内酰胺酶、甲氧西林/苯唑西林耐药、万古霉素的耐药性，诱导性克林霉素的耐药。
1.1 青霉素耐药和ß-内酰胺酶
用青霉素检测青霉素酶不稳定青霉素类（氨苄西林、阿莫西林、阿洛西林、羧苄西林、美洛西林、哌拉西林和替卡西林）的敏感性；一些产β-内酰胺酶的葡萄球菌在药敏试验中对青霉素敏感，因此在报告葡萄球菌对青霉素敏感前，应对青霉素的MIC≤0.12ug/ml或抑菌圈直径≥29mm的菌株做β-内酰胺酶测试。
ß-内酰胺酶检测方法：硝噻酚实验和青霉素纸片抑菌环边缘实验。硝噻酚实验适用于葡萄球菌，青霉素纸片抑菌环边缘试验只用于金黄色葡萄球菌的检测。检测金黄色葡萄球菌是否产生ß-内酰胺酶，青霉素纸片抑菌环边缘试验比硝噻酚实验试验敏感，如果硝噻酚实验为阴性，建议使用对青霉素纸片抑菌环边缘进行评估实验进一步检测，保证青霉素治疗有效性。
       

        1.2 甲氧西林/苯唑西林耐药
        对青霉素酶稳定的青霉素类耐药称为耐甲氧西林（例如，甲氧西林、萘夫西林和苯唑西林）。因此，即使甲氧西林已不再用于药敏试验和治疗，缩写字母MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）或MRS（耐甲氧西林葡萄球菌）仍广为使用。
        1.2.1 菌群 对甲氧西林/苯唑西林耐药的菌群包括金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌和其他凝固酶阴性葡萄球菌。路邓葡萄球菌确定对甲氧西林/苯唑西林耐药时被划规至金黄色葡萄球菌。
1.2.2 对苯唑西林耐药性检测的方法
在药敏报告为敏感前，用苯唑西林孵育整24h用以检测MRS，用头孢西丁时，金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌孵育16-20h，凝固酶阴性葡萄球菌需孵育24h。
1.2.2.1苯唑西林为基础的方法
以苯唑西林为基础的方法有琼脂稀释法，接种物为直接菌落悬液获得0.5麦氏浊度，使用1ul接种环蘸取菌液，在含4% NaCl MHA平板上涂成直径10-15mm斑点。替代方法，用棉拭子蘸取菌液涂成类似大小的斑点或划清四分之一区。孵育条件为33-35℃；空气环境（试验温度高于35℃不能检出MRSA），孵育时间24小时，结果如用透射光仔细检查＞1个菌落或存在淡的膜状生长＞1个菌落则为苯唑西林耐药，结果判读见表1。
1.2.2.2 头孢西丁为基础的方法
头孢西丁纸片扩散法适用于金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌，肉汤微量稀释法适用于金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌。纸片扩散法遵照标准纸片扩散法进行，肉汤微量稀释法遵照标准的肉汤稀释法进行，结果判读见表1。

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