联检胶体金法肌钙蛋白I 定性分析对急性心肌梗死的诊断研究

银狐

【摘要】目的：探讨胶体金法检测肌钙蛋白I（cardiac tropnin I，cTnI）对急性心肌梗死的诊断的意义。方法：对130例怀疑急性心肌梗死患者分别采用胶体金法及免疫发光法检测血清cTnI水平，其结果分别进行相互间及与临床诊断比较，分析二者测定cTnI的灵敏度、特异度、符合率及一致性。结果：胶体金法与免疫发光法检测结果比较，两种方法结果无显著性差异，具有极好一致性，其灵敏度、特异度、符合率分别为93.5%、100%、95%。结论：胶体金法对cTnI进行定性检测，操作简便快速，特异性和灵敏性高，用血量少，可作为院前急救重要的检验方法, 有助于早期诊断, 及时指导治疗, 减少心肌梗死的病死率。
      【关键词】 胶体金法 免疫发光法 肌钙蛋白I 急性心肌梗死

      急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction，AMI）是临床常见的严重心血管疾病之一，也是引起心脏猝死的主要原因，占我国死亡率第一位，而且其发病率及死亡率有逐年增加的趋势。根据欧洲心脏学会（ESC）与美国心脏学会（ACC）2000年的标准，心肌肌钙蛋白I（cardiac tropnin I，cTnI）在AMI发病后迅速释放入血，发病后4-8h升高，14-36h达峰值，持续3-7d，在心肌损伤中具有特异性高和灵敏度高的特点，对于AMI的早期诊断有很好的价值，利于及早治疗，已成为评价心肌坏死和诊断心肌梗死的首选心脏标志物。目前临床应用cTnI检验方法主要是化学发光法和免疫层析定量法等。我科采用胶体金法对cTnI进行定性检测，评估其对急性心肌梗死的诊断价值。
1. 研究方法
      1.1 入选标准：选取2012年8月1日至10月31日期间，因“胸闷胸痛”怀疑急性冠脉综合症（ACS）来我院急诊就诊的患者共130例作为研究对象，排除非冠脉源性（如：心脏创伤、心包炎、心肌炎等）及非心源性情况（如：脓毒症、肺栓塞、气胸等）。
      1.2 检验方法：采用自身对照试验方法进行诊断试验。以上对象采3ml 抗凝静脉血及指尖全血35ul，静脉血样品送检验科进行免疫发光法测定，指尖全血35ul立即采用胶体金法进行测定。免疫发光法采用BACKMAN公司的免疫测定系统，Access肌钙蛋白I试剂盒（批号：219987），试剂均为仪器原厂配套试剂；胶体金法采用上海川至生物技术有限公司的ZAP快速检测试盒（批号：B0112061），灵敏度0.5ng/ml，实验操作均严格按照试剂盒说明进行。
      1.3 结果判断: 所有患者根据是否具有典型临床症状（如胸痛不适），典型缺血性心电图表现，实验室心肌酶活性异常升高，上述三项特征中任意具备二项为临床诊断阳性；免疫发光法参考值≥0.5ng/ml为阳性，＜0.04ng/ml为阴性；ZAP快速检测卡T检测区显色为胶体金法阳性。
      1.4 统计学分析：应用SAS8.2统计软件，计数资料采用卡方检验及Kappa检验，P<0.05为差异有统计学意义，Kappa>0为检测结果一致。
2. 结果
      2 . 1 一般结果： 130 例符合入选标准的研究对象， 临床诊断结果有阳性93 例（ 7 1 . 5 % ） ， 阴性37 例（ 28.5%）；免疫发光法结果有阳性92例（73%），阴性34例（27%），其中4例参考值≥ 0 . 0 4 n g / m l 、＜ 0 . 5 n g/ml为怀疑存在心肌损伤，未纳入分析数据； 胶体金法结果有阳性8 7 例（ 6 6 . 9 % ） ， 阴性4 3 例（33.1%）。两种检验方法分别与临床诊断结果进行卡方检验，组间比较阳性率的差异均无统计学意义（P>0.05）。

      2.2 胶体金法的各项分析性能指标：分别以临床诊断及免疫发光法为标准计算各项指标。

      2.3 胶体金法与免疫发光法比较：对两种方法检测结果进行卡方检验：X2=0.482，P>0.05，两组阳性率的差异无统计学意义；Kappa检验：Kappa=0.90>0.80，具有极好的一致性。

3. 讨论
      自2012年8月1日至10月31日期间入选的130例临床研究对象分别通过胶体金法与免疫发光法进行cTnI检验，与临床诊断结果进行比较，提示胶体金法的灵敏性93.5%、特异性100%、符合率95%、阳性预测值100%，与免疫发光法的一致性极好，两者阳性率差异无统计学意义。胶体金法“阳性”结果可以诊断被检者存在心肌损伤，需结合病史、临床症状及其他辅助检查排除其他源性心肌损伤才能明确AMI诊断；其方法灵敏度为0.5ng/ml，若检验时间为超早期（发病后2h），cTnI未有明显升高变化，可影响检测结果，故“阴性”结果不能完全排除AMI，需每隔0.5-1h重复检查以明确排除。
      急性冠脉综合征（Acute Coronary Syndrome, ACS）是一种由急性心肌缺血引起的临床综合征，冠状动脉不稳定斑块破裂伴血栓形成是引起ACS最重要的原因，临床结果取决于斑块破裂及血栓形成的程度和速度。根据心电图及心肌坏死标志物表现分为ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）及不稳定心绞痛（UA），三者的治疗策略有所差异。根据2010年美国心脏协会（AHA）心血管急救指南中提出STEMI在评估时间和风险后，若症状出现的时间≤3h及无溶栓治疗禁忌症，首选溶栓治疗（从进门至用药的最佳时间≤30min）；若>3h且≤12h、存在溶栓治疗禁忌症、未确诊STEMI，首选有创干预（PCI球囊扩张治疗）（能熟练进行PCI业务的机构及医务人员，从进门至球囊扩张的最佳时间≤90min）；若STEMI>12h或NSTEMI/UA（高至中危）不宜溶栓治疗，以抗血小板及抗凝治疗后择期介入治疗为主，故诊断结果的及时、准确对于进一步的治疗和预后有很大的影响。有研究表示，AMI患者发病时,若延缓救治1h，其病死率为1.6%。
      胶体金法检测cTnI为定性结果（灵敏度为0.5ng/ml），采用胶体金免疫层析原理，是利用金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。操作中采用指尖末梢全血一滴（约35ul），检测结果需时约10min，与临床上常规使用的定量检测免疫发光法相比，无需离心静脉血及专业的大型检验仪器，操作更为简便快捷，而且结果稳定、重复性好，适用于POCT、院前或现场急救，可通过快速简便的辅助检查协助诊断，如中小或偏远地区医院欠缺PCI介入治疗条件、往上级医院转运路途或急救车等情况，争取及早诊断、在再灌注治疗时间窗内给予最合适治疗。而对于住院患者确诊疾病及连续观察评估病情变化或疗效时，免疫发光法的定量检测结果较为合适。
      在本研究中，胶体金法与目前常规临床检验方法的差异无统计学意义，且有极好的一致性，高符合率、特异性、灵敏性，标本用量少，操作简便，容易推广等优点，其阳性预测值100%反映出试验结果为阳性患者确诊心肌损伤的概率为100%，可作为临床肌钙蛋白I 检验的简便而重要的辅助手段，为临床医生提供及时的信息，有助于早期诊断、指导及时治疗，减少心肌梗死的病死率。
      心肌梗死发病后在不同时间阶段心肌细胞释放多种酶和蛋白进入血液循环，随着诊断检验技术的不断完善发展，cTnI对AMI的诊断价值已明确，并作为常规诊断的检查。胶体金法对cTnI的阳性诊断率高，可作为AMI重要的辅助检验，但其定性结果灵敏度≥0.5ng/ml，若cTnI参考值0.5~0.04ng/ml可存在假阴性情况，其可能原因(1)检验时间处于cTnI未有明显升高段阶；(2)存在良好的侧支循环保护心肌；(3)心肌对缺血敏感程度较低。需反复检验以明确cTnI变化情况，若评估疗效，宜采用免疫发光法定量检测。
      总之，与传统免疫发光法检测cTnI相比，胶体金法是一项操作方法简单、临床样品需求量少、检测灵敏度高和特异度好的新方法，适合院前或基层医院快速筛选AMI患者，为缺血再灌注损伤的积极治疗赢得时间，有助于改善患者预后和降低临床死亡率。
                                                                                                          摘自定向点金《临床实验室》杂志2013年第二期
                                                                                                                                编辑：范伟伟