临床生化诊断试剂盒的性能评价方法

炎风

       为了确保诊断试剂盒的质量，国家卫生部于1992 年开始颁发了38 种临床生化诊断试剂“质量检定暂行标准”，使诊断试剂的生产、检定和销售走上了规范化道路。
一、说明书审查
       说明书是用户了解和正确使用试剂盒的指南。审查内容包括：①试剂名称；②用途；③测定原理和技术要求；④试剂盒内的包装内容；⑤适用仪器；⑥标本要求；⑦测定步骤及注意事项；⑧贮存的条件及有效期；⑨性能特征，包括准确度、精确度、特异性、受干扰的程度、线性范围、参考范围；⑩生产单位名称、地址、邮编及电话。
二、理学检验与评价
       理学检验的内容有：①外包装应完整牢固，封口严密，标签清晰；②有详细的用户说明书，卫生部批准的生产文号，生产日期，有效期和保存条件；③粉剂型应均匀无凝块，不粘附瓶壁；④液体型试剂应无沉淀，无混浊，无渗漏；⑤复溶后或液体试剂的pH 应符合标准规定。
三、性能指标的检验与评价
（一）线性范围的测定
       试剂盒的线性范围，既是衡量其质量的重要指标，也是保证正确使用和鉴定试剂盒的关键指标之一。一般试剂盒的线性范围应能覆盖临床上的参考值范围和常见疾病的医学决定水平，以减少样品稀释重测的机会。一旦线性范围变窄即应废弃。造成线性范围变窄的原因常见的有：①生产中组份投料量不足；②生产后组分稳定性差；③运输和贮存不当等。
（二）观察时间反应曲线
       酶活性测定时用中等酶活性的定值血清，代谢产物测定时用稍高于参考值上限的标准液或定值血清，按说明书规定对样品进行测定，每2s～10s 记录一次吸光度，连续监测15min。同时用蒸馏水代替样品做试剂空白的时间反应曲线）。以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图，观察动态期（包括延迟期、线性期、混合期）和平衡期出现、持续和终止的时间，分析有关的性能指标。
       1．终点法 ①试剂空白的吸光度是否符合规定标准，否则会影响测定的精密度和准确度；②试剂空白的时间反应曲线应平坦，且无明显波动，否则，说明试剂本身不稳定，会导致测定偏差；③反应能否在规定的时间内达到平衡，达到平衡的时间应在终点法读取测定吸光度的时间之前。反应速度慢的原因，常为试剂中酶量不足或酶质量不好，或反应条件不是最适条件；④反应达到平衡后，吸光度最大并维持不变，这一期间为反应平衡期，终点法测定应在这一期间读取吸光度。
       2．连续监测法 ①试剂空白值是否符合规定，吸光度下降型的反应，试剂空白吸光度应在1.5左右，吸光度上升型的试剂空白吸光度越低越好，不符合说明书中规定值者不宜使用；②试剂空白的时间反应曲线应平坦，吸光度变化（△A/min）应≤0.001，若大于此值，表明试剂本身分解变化，会使测定结果产生误差；③延迟期、线性反应期与设定的实验参数是否相符，若不相符应予修改；④观察时间反应曲线的斜率，通过定值血清，分析试剂盒的灵敏度。当试剂盒中底物浓度不足，辅助酶或指示酶的酶量不足或质量不好，反应条件不是最适条件等情况时，时间反应曲线斜率下降，灵敏度低，测定结果有严重比例误差，这种试剂盒无法纠正，不能使用。
（三）稳定性试验
       稳定性是指试剂在不同状态和不同条件贮存后保持其测定准确性的能力。大多数试剂盒具有原包装形式和使用时的工作液两种形式，少数试剂盒的原包装即为工作液。评估试剂盒的稳定性应包括原包装和工作液在试剂盒指定条件下的稳定性（试验方法见诊断试剂盒的选择）。
       试剂盒的稳定性与贮存条件密切相关，工作液的稳定性还和使用中污染与否有关，在评估时，须保持指定贮存条件并要严防污染。
       其他还需做准确度试验、精密度试验和抗干扰试验，具体做法请参照方法学评价相关内容和试剂盒的性能指标。
四、试剂盒性能检测的要求
       进行上述各项性能指标检测时，要求操作正规，使用的容器均经过校准，自动分析仪或分光光度计的波长、灵敏度、稳定性均符合要求，温度准确、蒸馏水合格，标准参考物含量或定值血清的靶值均经验证。因为测定值是否准确可靠，除与试剂有关外，上述这些条件都是影响因素，如果上述因素控制不好，试剂盒质量好，测定的结果也会出现较大误差。因此，在分析试剂盒性能检测结果时，要全面分析，排除了试剂盒以外的影响因素之后，才能说明是试剂盒本身的影响，切不可简单从事。当然，用公认的高质量同种试剂盒做对照，同样条件下与被检试剂盒同时测定相同样品，比较两种试剂盒测定结果的差异，有利于区别上述因素的影响，所以，设立此种对照，对评估试剂盒的性能是很必要的。
                                                                                                    编辑：范伟伟