氯化钙对活化部分凝血活酶时间测定的影响

财小弟

                                                            江苏省连云港市东方医院检验科     闫朝春，安仲武，薄维波
       摘 要：目的 探讨氯化钙(CaCl2)溶液对活化部分凝血活酶时间(APTT)测定结果的影响。方法 分别用0.025、0.017、0.013 mol/L 3个浓度的CaCl2溶液分别以鞣花酸和白陶土2种激活剂检测APTT；同时将0.025 mol/L 的CaCl2溶液暴露于空气中不同天数，在2种原理的血凝仪上对临床样本和质控品进行APTT检测。结果 (1)随着CaCl2：溶液浓度的降低，以鞣花酸或白陶土为激活剂测定APTT 结果与浓度为0.025 mol/L 的CaCl2溶液组比较均延长(P<0.05)，且以白陶土为激活剂的变化大于以鞣花酸为激活剂测定的变化(P<0.05)。(2)随着CaC12溶液在空气中暴露天数的增加，在2台血凝仪上测定APTT的结果较0 d(即刻)检验的APTT结果均延长(P<0.05)，且在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪上测定的APTT 小于在LG-Paber-1 型血凝分析仪测定的结果(P<0.05)。结论 临床检测APTT 时，应严格控制CaCl2 的浓度和开瓶暴露天数，应根据各实验室应用的激活剂和仪器建立参考范围。
       关键词：活化促凝血酶原时间； 氯化钙； 影响因素

       活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)测定是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，也可作为内源性途径凝血因子的定量试验，可检测除因子Ⅶ外的其他血浆凝血因子，特别是用于因子Ⅷ 、Ⅸ 、Ⅺ 、Ⅻ 和前激肽释放酶的测定[1-2]，同时，APTT测定可用于肝素治疗监控[3-4]。目前，临床实验室检测APTT，是将待测血浆加入部分凝血活酶溶液，预温一定时间后，再加入氯化钙(CaCl2)溶液，纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测APTT。而CaCl2 溶液对测定APTT 的影响，笔者进行了探讨，现将结果报道如下。
1 材料与方法
       1.1 材料
       1.1.1 血浆标本  选取临床做凝血功能检测的无黄疸、无溶血、无脂血的标本。标本为静脉血置于含有1/10体积0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝剂(1份抗凝剂+9份全血)的硅化玻璃真空采血管中，轻轻颠倒混匀，3 000 r/min(或2 500g)离心15 min，收集上层液(黄色血浆)备用。
       1.1.2 CaCl2 溶液制备浓度为0.025、0.017、0.013 mol/L的CaCl2 溶液。
       1.2 仪器与试剂 采用LG-Paber-1型血凝分析仪(北京世帝科学仪器公司)和Sysmex CA-500全自动血凝分析仪(希森美康上海公司)。试剂为上海太阳生物技术有限公司提供，激活剂为鞣花酸(批号：892019)和白陶土(批号：311023)及0.025 mol/L 的CaC12溶液。质控品由Dade Behring提供(批号：54816824)。
       1.3 方法
       1.3.1 分别用3个不同浓度的CaC12溶液代替APTT试剂盒中提供的CaC12 溶液，对36例l临床标本分别用鞣花酸作为激活剂在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪和用白陶土作为激活剂在LG-Paber-1型血凝分析仪上进行APTT检测。
       1.3.2 将APTT试剂盒中提供的CaC12 溶液分装成6份，分别暴露于实验室空气中0、1、2、3、4、5 d后封口备用，对38例临床样本分别在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪和LG-Paber-1型血凝分析仪上进行APTT测定。
       1.3.3 将1.3.2中所得的CaC12溶液在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪和LG-Paber-1型血凝分析仪上对质控品进行APTT测定。
       1.4 统计学处理 计量资料以( X±S )表示，组间均数比较运用方差检验进行分析，相关性采用直线相关回归分析。所有数据均在Stata 9.2统计软件包上进行处理。
2 结 果
       2.1 3个不同浓度的CaC12溶液以鞣花酸和白陶土为激活剂对36例临床标本APTT 检测结果 CaC12 溶液随着浓度(0.025 mol/L )的降低，以鞣花酸或白陶土为激活剂测定APTT结果与浓度为0.025 mol/L 的CaC12 溶液组比较均延长(P<0.05)，且2种激活剂测定的结果差异有统计学意义(P<0.05)，以白陶土为激活剂的变化大于以鞣花酸为激活剂测定的变化，见表1。

       2.2 用在空气中暴露不同天数的CaC12(0.025 mol/L)溶液在2台血凝仪上检测38例样本结果 随着CaC12 溶液在空气中暴露天数的增加，在2台血凝仪上测定APTT 的结果较0 d(即刻)检验的APTT结果均延长(P<0.05)，且2台仪器间的结果差异有统计学意义(P<0.05)，在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪上测定的APTT小于在LG-Paber-1型血凝分析仪测定的APTT结果，见表2。

       2.3 用在空气中暴露不同天数的CaCl2 (0.025 mol/L)溶液在2台血凝仪上检测质控品(2次测定值的均值表示)结果Sysmex CA-500全自动血凝分析仪(Y1)对暴露天数(X)的线性方程为：Y1=0.283X+23.9(r=0.9765)；LG-Paber-1型血凝分析仪(Y2 )对暴露天数(X)的线性方程为：Y2=0.391X+34.9(r=0.9806)，见表3。

3 讨 论
       以0.025 mol/L CaC12 溶液为参考，随着浓度的降低，2种激活剂测定的APTT结果均延长(P<0.05)，且2种激活剂测定的结果差异有统计学意义(P<0.05)，以白陶土为激活剂对于CaC12 溶液降低变化的敏感性大于以鞣花酸为激活剂测定的变化。至于这种变化与2种激活剂的检测原理有一定关系，白陶土不溶于水，使试剂成为混悬液，它以细小颗粒存在，可影响小铁珠在槽内的运动，摩擦力增加，阻力增大，黏度增加，振幅变小得快，所需时间短；极小颗粒的白陶土表面积大，易激活因子Ⅺ 、Ⅻ ，使它能够在脑磷脂和Ca2+参与下，很快包绕纤维蛋白而凝固。鞣花酸溶于水，以离子形式存在，是透明的液体，该试剂用于全自动血凝仪，它的血浆凝固时间几乎不受试剂本身的影响[5]。
       用在空气中暴露不同天数的CaCl2 (0.025 mol/L)溶液在2台血凝仪上检测APTT结果研究发现，随着CaCl2溶液在空气中暴露天数的增加，在2台血凝仪上测定APTT 的结果较0d(即刻)检验的APTT 结果均延长(P< 0.05)，这与相关文献[6-7]报道一致。分析其原因可能与下列因素有关：(1)随着CaC12(0.025 mol/L)溶液在空气中暴露天数的增加，由于水分蒸发，使CaC12溶液浓度增大，其实际浓度大于0.025 mol/L。至于大于0.025 mol/L 的CaCl2 溶液，随着浓度的增加对APTT结果变化的影响有待做进一步的探讨。(2)随着CaC12(0.025 mol/L)溶液在空气中暴露天数的增加，CaC12 溶液的酸碱度发生变化，这也可能使APTT 测定结果延长[8]。笔者还发现2台仪器间的结果存在差异(P<0.05)，在空气中暴露不同天数的CaC12(0.025 mol/L)溶液在Sysmex CA-500全自动血凝分析仪上测定的APTT变化小于在LG-Paber-1型血凝分析仪测定的APTT变化结果。这也可能与2台仪器的工作原理有关。Sysmex CA-500血凝仪原理为按一定比例混合后的样本与试剂由于发生散射光的光强与凝集的程度有一定的关系，通过光电转换把这微小的变化转化成电信号并加以放大。以时间为x轴，光强为y轴记下光强的变化曲线。理论上把光强的变化接近恒定时定义为100%，并称之为百分活动度。通过微处理器记录下这一变化曲线，与预先描绘好的标准曲线加以比较，从而换算出各个项目的数值[9]。而LG-Paber-1血凝仪是利用磁感应原理的凝血检测法，即在待检样品中加入一磁性小铁珠，测试槽两侧独立的线圈交替产生电磁场，使槽内小铁珠在恒定的血浆黏度中保持恒定的摆幅运动；采用电磁式感应器，测定小铁珠的不同振荡幅度，根据检测项目不同，仪器可产生不同的磁场强度，由于是感应磁珠的相对运动，所以不受原血浆黏度的影响。当血浆凝固时，其黏稠度增加，小铁珠摆幅逐渐变小至原振幅的50%时，计算机系统根据小铁珠振幅可精确测试血浆凝固时间[10]。有学者认为开瓶CaC12(0.025 mol/L)溶液的放置时间不能太长，3 d内使用其测定结果的准确性最好，否则，APTT测定结果将延长，从而影响结果的准确性，本文结果也支持此观点[11]。
       总之，临床检测APTT时，影响因素甚多[12-13]，应严格控制CaC12 浓度和开瓶暴露天数，应根据自己实验室应用的激活剂和仪器建立参考范围，至于不同系统检测APTT 的相关性有待进一步探讨。
参考文献
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                                                                                                           编辑：范伟伟