尿纤维连接蛋白在诊断上尿路移行细胞癌的临床意义

进进

凌海滨1 赵 莹2 李向东1 苗文隆1 李凤歧1 成日青1
                                                  (1．河北北方学院附属第一医院泌尿外科    2．浙江大学医学院附属第一医院检验科)
      【摘要】目的：探讨尿纤维连接蛋白(fibronectin，Fn)与上尿路移行细胞癌的生物学关系。方法：采用ELISA法检测30例上尿路移行细胞癌、25例其它泌尿系疾病患者及20例正常人尿液Fn含量，并同时测定尿肌酐(Creatin，Cr)，计算Fn/Cr 比值，比较各组人群尿Fn/Cr比值之间的差异；分析不同肿瘤分期、分级尿Fn/Cr之间的差异；比较其与尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性。结果：上尿路移行细胞癌尿Fn/Cr比值为(46.4士26.5)mg/mol，明显高于正常人(14.7士8.8)mg/mol及其它泌尿系疾病患者(28.2士22.7)mg/mol。以34mg/mol为标准，尿Fn/Cr比值诊断上尿路移行细胞癌的灵敏度和特异度分别为73.3和77.8 。尿Fn/Cr比值与上尿路肿瘤分期分级有关。尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性为53.3 ，采用Fn/Cr检测较脱落细胞学检查敏感性无统计学意义(P>0.05)。结论：尿Fn/Cr 可作为上尿路移行细胞癌的诊断指标。其高低与膀胱癌的分期、分级有关，可大致判断浸润度和恶性度，并可用于上尿路移行细胞癌的预后评估。
     【关键词】尿纤维连接蛋白；尿纤维连接蛋白/尿肌酐比值；上尿路；移行细胞癌

       上尿路移行细胞癌中基底膜Fn有不同程度丧失，这样使尿液中Fn含量有所变化。Fn在诊断膀胱癌并估测预后的意义已有相关报道。本实验拟通过检测尿Fn含量在上尿路移行细胞癌患者、正常人及其它泌尿系疾病患者中的变化，证实尿Fn在上尿路移行细胞癌中的临床应用价值。
1 资料和方法
1.1 一般资料
       1.1.1 上尿路移行细胞癌组 30例，男21例，女9例；年龄：42~80岁，平均63岁；肾盂癌23例，其中I 期4例，Ⅱ期15例，Ⅲ期3例，Ⅳ期1例；输尿管癌7例，其中I 期3例，Ⅱ期2例，Ⅲ期1例，Ⅳ期1例。Ⅳ期以前患者均手术治疗。
       1.1.2 其它泌尿系疾病组 25例，男14例，女11例；年龄30～78岁，平均60岁；其中BPH2例，肾囊肿2例，肾结石4例，输尿管结石4例，输尿管息肉2例，肾盂/膀胱炎2例，肾癌3例，肾结核2例，输尿管炎性狭窄4例。
       1.1.3 正常对照组20例，男12例，女8例；年龄24～77岁，平均58岁。
1.2 方法
       1.2.1 标本采集前一天晚上10时后禁水。留取清晨第一次全程尿液，分为两份，一份送检验科检测尿Cr，另一份则在离心机3000r/min离心后，收集上清液，置于干净的试管，封盖，于-80℃保存。离心后尿沉渣行尿脱落细胞学检查。
       1.2.2 标本检测 ELISA法测定尿Fn，单位ug/L。试剂盒由DR Lab California提供。测定尿Cr，单位umol/L。计算Fn/Cr 比值，单位mg/mol。
       1.2.3 结果计算 由试剂盒所提供标准品测定的OD值，绘制标准曲线，根据待测尿标本测定的OD值，由标准曲线计算出Fn的浓度，并计算Fn/Cr比值。所有数据在不同多组间比较采用单因素方差分析，计量资料采用 X2检验。
2 结果
       正常对照组平均(14.7±8.8)mg/mol，上尿路移行细胞癌组平均(46.4±26.5)mg/mol，两组间有显著差异(P<0.01)，表明尿Fn/Cr在上尿路移行细胞癌患者中明显高于正常人；其它泌尿系疾病组平均(28.2±22.7)mg/mol，与上尿路移行细胞癌组有差异性(P<0.05)，表明尿Fn/Cr在上尿路移行细胞癌患者中明显高于其它泌尿系疾病患者(见表1)。

       Ⅱ期上尿路移行细胞癌平均(49.1±28.9)mg/mol，与I 期上尿路移行细胞癌平均(29.7士19.5)mg/mol有显著差异(P<0.05)，表明Fn/Cr在Ⅱ期上尿路移行细胞癌患者中明显高于I 期上尿路移行细胞癌患者。Ⅲ ～ Ⅳ 期与Ⅱ期TCC 间有显著差异(P<0.01)，表明Fn/Cr在Ⅲ～ Ⅳ 期上尿路移行细胞癌患者中又明显高于Ⅱ期上尿路移行细胞癌患者。由下表结果可知，Fn/Cr与上尿路移行细胞癌分级也有显著关系。

       本实验敏感性为73.3% (22/30)，特异性为77.8% (35/45)，假阳性率22.2% ，假阴性率26.7% ；用细胞学检测，敏感性为53.3% (16/30)，特异性为97.8% (44/45)。 X2检验提示采用Fn/Cr检测较脱落细胞学检查敏感性无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论
       上尿路移行细胞癌的诊断方法有超声、IVU、CT、MRU、膀胱镜及细胞学检查等，而准确价廉、快捷安全、无创的诊断方法一直是我们的研究重点。
       Fn在泌尿系统只存在于尿路上皮的基底膜及粘膜下层，在完整的上皮表面基本无表达，尿液中Fn一般认为由尿路基底膜释放。上尿路移行细胞癌中基底膜Fn有不同程度丧失而使尿液中Fn含量升高。尿液长时间搁置，化学成分及蛋白成分可能会被破坏，Fn的稳定性会降低，故采集一次性尿液立刻处理较收集24h尿更合理。同时，由于尿液的浓缩与稀释有较大的变化，而不同个体间尿液中Cr 相对较稳定，因此同一尿样标本的尿Fn/Cr比值更趋于准确及稳定，更能反映个体的实际状况。
       本实验上尿路移行细胞癌患者尿液Fn/Cr明显高于正常人(3.16倍)及其它泌尿系疾病患者(1.65倍)，有明显的统计学意义(P<0.05)，表明尿Fn可作为上尿路移行细胞癌的诊断指标。
       本组实验结果表明，上尿路移行细胞癌随着病期发展，Fn/Cr 随之升高，阳性结果由I期的28.6% 升至Ⅲ～ Ⅳ期的100%，尤其对Ⅲ～ Ⅳ期上尿路移行细胞癌患者的诊断正确率高达100%；Fn/Cr 检测G1、G2、G3的敏感性为37.5%、75% 和87.5%，这与肿瘤侵犯基底膜以及肿瘤诱导产生的蛋白酶增加了Fn从基底膜中的释放有关。故随着上尿路基底膜中Fn的减少，细胞与细胞、细胞与基质问的粘附力降低，最终导致肿瘤细胞的游离，而使肿瘤浸润转移。故根据Fn可初步估计上尿路移行细胞癌患者的分期与分级。但Fn/Cr检测低分期和低分级上尿路移行细胞癌时，可能会出现较高的假阴性。
       我们对尿Fn/Cr与尿脱落细胞学检测上尿路移行细胞癌的敏感性进行了比较，结果显示两种检测方法无差异性(P>0.05)。尿脱落细胞学检查特异性高，但敏感性很低；尿Fn/Cr的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为73.3% 、77.8% 、68.8% 和81.4% 。在临床实践中，泌尿外科医生更关心不能错过临床意义上的肿瘤，并不十分排斥因假阳性而行膀胱镜检查。因此，作为一种筛选手段，敏感性和阴性预测比特异性更重要。Fn/Cr 和尿脱落细胞学检查一样，目前仍不能代替膀胱镜单独检测和筛查上尿路移行细胞癌。
       本研究的假阳性结果出现在泌尿系结石(2例)、感染(1例)、BPH(1例)及肾结核患者(2例)，提示可能与这些疾病有关，其详细机制有待于今后继续总结病例进行研究，因此临床上在应用尿Fn诊断上尿路移行细胞癌时须注意鉴别。
       综上所述，在诊断或鉴别上尿路疾患时，测定尿Fn含量是一种可行性较高的辅助检测手段，可以认为是诊断上尿路移行细胞癌以及估测其分期、分级很有价值的肿瘤标志物。

                                                                                                        编辑：范伟伟