多聚赖氨酸包被载玻片改良法

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　　原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。
  　　1. 清洗载玻片:
  　　(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。
  　　(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。
  　　(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。
  　　(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。
  　　2. 包被载玻片:
  　　(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。
  　　(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。对多张载玻片逐一进行涂片。
  　　(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。
  　　(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。
  　　(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。
  　　(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。
  　　改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。此外,改良后的处理技术操作步骤清晰详细,十分有利于初学者掌握。我们采用改良方法制备的800 余张切片,用于免疫组织化学时,没有出现一张脱片。同时,采用改良方法仅用10 ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,即可制备1000 张包被载玻片,既节约经费,又可几千张载玻片一次性处理后随时备用,以减少批量之间的误差。